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lu78wi

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于pET32a的HIS标签

pET32a中有2个His标签,我将我的序列插入他们之间,可是由于疏忽把下游的终止密码子没有去掉,使与我要表达蛋白下游紧邻的his不能表达,这样会不会造成后期蛋白纯化困难,我是要制备多抗。我要不要现在就重新设计下游引物?
谢谢前辈们。
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by lu78wi at 2013-03-08 16:54:05
我的蛋白是要为后续做多抗用的,那判断这个蛋白是否是我需要的目的蛋白只能通过看电泳后大小呢?...

一般是比较诱导前后的表达差异。多数情况下,电泳条带的分子量应该与理论值相差不远。
10楼2013-03-09 01:18:53
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查看全部 11 个回答

无为书生

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
只要表达带有一个His标签就能够纯化的。
2楼2013-03-08 10:50:03
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般都是带一个his tag的,载体上有两个是方便克隆的,没必要都留着。
3楼2013-03-08 11:25:04
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lu78wi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-08 11:25:04
一般都是带一个his tag的,载体上有两个是方便克隆的,没必要都留着。

那对纯化效率影响会不会很大?
4楼2013-03-08 11:52:00
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