24小时热门版块排行榜    

查看: 2162  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lws9930

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 求助 双向电泳提取的蛋白质 其浓度用什么测呀? 已有1人参与

各位大师,本人刚开始做双向电泳,组织用蛋白裂解液溶解后,想测其蛋白浓度,但用国产的试剂盒(BCA法)根本就测不出来啊,分光光度计都没法读数。我在测定过程中,还以蛋白裂解液也作为测定的对象,结果发现它同样与试剂盒中的反应液反应。这说明我的蛋白浓度不能用这个试剂盒测定,估计是蛋白裂解液中的某些成分与试剂盒中的东西反应了。请问你们在收集到蛋白后,都是用2D专用的进口试剂盒测定的吗?谢谢!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by lws9930 at 2013-03-07 09:05:01
追问一下,请问你在做双向电泳时,等电聚焦前一般是让胶面与蛋白接触后溶胀多久比较合适???...

我一般是在低电压下rehydrate 12小时。
8楼2013-03-07 09:58:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lws9930: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-03-07 08:36:10
不知道你的细胞裂解液的成分,BCA试剂盒应该对常用试剂的耐受浓度有详细的说明。试试能不能变动一下裂解液中干扰定量的组分。实在不行,把样品用丙酮沉淀后再定量吧。反正IEF的样品最好除盐。
2楼2013-03-06 07:43:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

darkarrow

新虫 (初入文坛)

你应该是组织裂解后,TCA-acetone沉淀,干燥后加入2D rehydration buffer溶解样品,离心取上清,再用BCA测吧,标准曲线的BSA同样要用rehydration buffer 溶解,否则不准
3楼2013-03-06 22:56:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lws9930

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-06 07:43:36
不知道你的细胞裂解液的成分,BCA试剂盒应该对常用试剂的耐受浓度有详细的说明。试试能不能变动一下裂解液中干扰定量的组分。实在不行,把样品用丙酮沉淀后再定量吧。反正IEF的样品最好除盐。

裂解液成分:7M尿素,2M硫脲,4%CHAPS,40mM Tris,40mM DTT,2% IPG buffer。看相关资料,说是DTT对试剂盒中的铜粒子有严重影响。再查查资料吧,谢谢你了!!!
4楼2013-03-07 08:45:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +14 爱看书的可乐 2026-08-26 16/800 2026-08-26 16:47 by skyjudy
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +6 process2012 2026-08-23 9/450 2026-08-26 15:33 by process2012
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +26 yaoyewhu2008 2026-08-20 28/1400 2026-08-26 13:49 by zzuzxg
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +4 叶九微 2026-08-26 4/200 2026-08-26 10:52 by xiacongxu
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
请填处理意见