24小时热门版块排行榜    

查看: 1318  |  回复: 9

cuicchao

金虫 (正式写手)

[求助] 细菌转化实验

做了好几次老出现这样的结果感觉很是不对啊,大家觉得这是怎么了?????[ Last edited by cuicchao on 2013-2-28 at 10:20 ]
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈:小木虫仅提供交流平台,不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布,如果其内容涉及到知识产权问题,其责任在于用户本人,如对版权有异议,请联系邮箱:xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : IMG_0452.JPG
  • 2013-02-28 08:32:16, 2.52 M
  • 附件 2 : DSC03381.JPG
  • 2013-02-28 10:20:37, 4.29 M

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

好心态;年轻派
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cuicchao

金虫 (正式写手)

大家帮忙,看下第二个图片,第一个传错了
好心态;年轻派
2楼2013-02-28 10:21:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mangmanglulu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by cuicchao at 2013-02-28 10:21:43
大家帮忙,看下第二个图片,第一个传错了

涂得多了 可以考虑划线
3楼2013-02-28 10:56:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cuicchao

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by mangmanglulu at 2013-02-28 10:56:53
涂得多了 可以考虑划线...

我具体这么做的:0.5微升的质粒,4.5微升的目的基因链接,50微升的DH5菌热激转化,加了900微升的LB培养基,225rpm,摇菌1小时,之后经过离心弃去700的培养基,余下的200微升左右重悬,吸取30微升涂的板子。之前也这么涂过,结果也挺好的。那么如果是这菌多了的缘故,里面成功转化的概率大不大啊?
好心态;年轻派
4楼2013-02-28 11:08:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mascotte

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2013-02-28 19:02:42
看起来不像是连接产物的转化,更像是质粒直接转化(扩增)的结果。另一种可能就是培养基的抗生素失效,导致无筛选的生长造成的。第一种情况需要确定质粒是否已经完全切开,第二种情况需要在涂板时做阴性对照,即同时用未转化的感受态细胞涂板,如果对照板有克隆,说明抗生素无效。
5楼2013-02-28 12:13:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cuicchao

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by mascotte at 2013-02-28 12:13:09
看起来不像是连接产物的转化,更像是质粒直接转化(扩增)的结果。另一种可能就是培养基的抗生素失效,导致无筛选的生长造成的。第一种情况需要确定质粒是否已经完全切开,第二种情况需要在涂板时做阴性对照,即同时 ...

谢谢,对于是不是质粒的直接连接问题可以排除,因为我用的质粒是通过双酶切回收的质粒,酶切效果还可以。下次做一个阴性对照看看。
好心态;年轻派
6楼2013-02-28 14:55:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhs521521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
菌液浓度高了,80rpm,1h;50ul菌液+200ulLB;
寻找真正的自我!
7楼2013-02-28 14:59:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-01 13:37:52
你涂得太多了,建议涂现在量的五分之一甚至十分之一吧。涂得太多了就不好挑单克隆了。不太像抗生素失效,如果是抗生素失效,会比现在长得更多的,会一片一片的根本看不出来。要么涂太多,要么假阳性太多,呵呵。挑几个看看吧
8楼2013-02-28 15:01:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mangmanglulu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by cuicchao at 2013-02-28 11:08:49
我具体这么做的:0.5微升的质粒,4.5微升的目的基因链接,50微升的DH5菌热激转化,加了900微升的LB培养基,225rpm,摇菌1小时,之后经过离心弃去700的培养基,余下的200微升左右重悬,吸取30微升涂的板子。之前也这 ...

你的抗生素用的什么?
9楼2013-03-01 12:40:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cuicchao

金虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by mangmanglulu at 2013-03-01 12:40:28
你的抗生素用的什么?...

氨苄青霉素,这几天挑了单克隆,5个克隆里面有一个克隆通过PCR扩增出了条带。
好心态;年轻派
10楼2013-03-04 17:19:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cuicchao 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 11:51 by xiangy672
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +6 349506619 2026-08-28 6/300 2026-08-31 08:43 by kingkocxr
[基金申请] 面上意见出来了 +10 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 19/950 2026-08-31 08:01 by blueearth171
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
信息提示
请填处理意见