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cuicchao

金虫 (正式写手)

[求助] 细菌转化实验

做了好几次老出现这样的结果感觉很是不对啊,大家觉得这是怎么了?????[ Last edited by cuicchao on 2013-2-28 at 10:20 ]
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好心态;年轻派
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cuicchao

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by mascotte at 2013-02-28 12:13:09
看起来不像是连接产物的转化,更像是质粒直接转化(扩增)的结果。另一种可能就是培养基的抗生素失效,导致无筛选的生长造成的。第一种情况需要确定质粒是否已经完全切开,第二种情况需要在涂板时做阴性对照,即同时 ...

谢谢,对于是不是质粒的直接连接问题可以排除,因为我用的质粒是通过双酶切回收的质粒,酶切效果还可以。下次做一个阴性对照看看。
好心态;年轻派
6楼2013-02-28 14:55:53
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cuicchao

金虫 (正式写手)

大家帮忙,看下第二个图片,第一个传错了
好心态;年轻派
2楼2013-02-28 10:21:43
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mangmanglulu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by cuicchao at 2013-02-28 10:21:43
大家帮忙,看下第二个图片,第一个传错了

涂得多了 可以考虑划线
3楼2013-02-28 10:56:53
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cuicchao

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by mangmanglulu at 2013-02-28 10:56:53
涂得多了 可以考虑划线...

我具体这么做的:0.5微升的质粒,4.5微升的目的基因链接,50微升的DH5菌热激转化,加了900微升的LB培养基,225rpm,摇菌1小时,之后经过离心弃去700的培养基,余下的200微升左右重悬,吸取30微升涂的板子。之前也这么涂过,结果也挺好的。那么如果是这菌多了的缘故,里面成功转化的概率大不大啊?
好心态;年轻派
4楼2013-02-28 11:08:49
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