24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 596  |  回复: 3

budinggguodu

金虫 (初入文坛)

[求助] 同源克隆 出条带后测序结果很纠结

我同源克隆后做了胶回收 然后连接转化后测序
后来又拿胶回收产物又PCR了一次 再回收连接转化测序
结果这两次结果不一样 并且都不是要的条带 本人新虫 想求助一下 我不会是挑了杂菌了吧。。。可是菌落PCR不管是M13还是特异的引物 都出来了很亮的条带。纠结了 是不是本来引物就不好 扩出来的条带就不是想要的目的条带呢。。。唉 祝大家试验顺利。。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cnliu51

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引物特异性不高,或PCR时退火温度低造成的。
2楼2013-01-26 06:18:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxt86

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
budinggguodu: 金币+1, 有帮助 2013-01-28 13:01:38
budinggguodu: 金币+1, 有帮助, 谢谢你啦 测序结果确实有个反向的 可惜我反向试了试还是在NCBI里面找不到条带很惆怅。。。准备换个引物再试试吧 同源克隆好惆怅啊。。。祝你一切顺利 2013-02-14 21:33:41
LZ说的这个很亮的条带是指什么?条带大小和你预期的一样吗?M13是不是比特异引物稍稍长一点?如果楼主是新虫,弱弱的问一下,是TA克隆吗?那样的测序结果没有方向性,可能需要反向互补。希望对您有帮助。
3楼2013-01-27 04:32:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

budinggguodu

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cxt86 at 2013-01-27 04:32:04
LZ说的这个很亮的条带是指什么?条带大小和你预期的一样吗?M13是不是比特异引物稍稍长一点?如果楼主是新虫,弱弱的问一下,是TA克隆吗?那样的测序结果没有方向性,可能需要反向互补。希望对您有帮助。

菌落PCR条带很亮 但是大小和最一开始的不太一样 不过是月牙形的 所以觉得大小好像不准 M13的 倒是比特异性的长一些 总体是对的 但是挑了很多菌 出来的条带都不在同一个水平线上。。。。是TA克隆 什么叫反向互补啊?是说反向插入载体吗?哦 有道理 我再试试看不过 谢谢你
4楼2013-01-28 13:01:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 budinggguodu 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0855求调剂材料 +10 红桃灼灼 2026-04-04 10/500 2026-04-05 18:08 by 猪会飞
[考研] 化学调剂 +14 艾志恒 2026-04-03 15/750 2026-04-05 18:06 by 猪会飞
[考研] 346分的生物与医药08600求调剂 +5 常雨阳上岸 2026-04-05 6/300 2026-04-05 13:42 by imissbao
[考研] 一志愿南航,数一英一学硕317求调剂!! +5 Acaciad 2026-04-04 5/250 2026-04-05 12:31 by 搏击518
[考研] 一志愿电子科技大学085600材料与化工 329分求调剂 +10 Naiko 2026-04-04 10/500 2026-04-05 09:40 by sam3303
[考研] 找调剂 +7 楚乔乔 2026-04-01 7/350 2026-04-05 09:07 by dick_runner
[考研] +5 化工专硕323分 2026-04-04 5/250 2026-04-05 08:02 by 544594351
[考研] 求生物学学硕调剂——364分 +7 云朵遛弯指南 2026-04-04 7/350 2026-04-04 22:49 by zhyzzh
[考研] 291求调剂 +4 迷蒙木木 2026-04-01 5/250 2026-04-04 15:59 by sihailian3
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学085600英一数二337分求调剂 +11 lyz0427 2026-04-03 11/550 2026-04-04 15:31 by dongzh2009
[考研] 调剂0855-288 +5 x熊二a 2026-04-03 5/250 2026-04-04 00:19 by 猪会飞
[考研] 274求调剂 +9 顺理成张 2026-04-03 10/500 2026-04-03 15:10 by 啊俊!
[考研] 求材料调剂 一志愿南昌大学 328分 +5 yyy..... 2026-04-03 5/250 2026-04-03 13:46 by 百灵童888
[考研] 一志愿华东理工大学,080500学硕,317分,求调剂 +13 s1145 2026-03-31 15/750 2026-04-03 11:44 by msi123
[考研] 274求调剂 +10 薛定谔的虎。 2026-04-01 10/500 2026-04-03 10:13 by tianyyysss
[考研] 085600,320分求调剂 +6 大馋小子 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:54 by dongzh2009
[考研] 0805求调剂 +8 是水分 2026-03-31 8/400 2026-04-02 10:46 by guanxin1001
[考研] 一志愿346上海大学生物学 +3 上海大学346调剂 2026-04-01 3/150 2026-04-02 08:36 by w虫虫123
[考研] 262求调剂 +9 励志一定发文章 2026-03-31 10/500 2026-04-01 12:22 by sunshine0013
[考研] 0855机械初试280求调剂 +3 kazenotori 2026-03-31 3/150 2026-04-01 10:08 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见