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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 转基因检测怎么一直P不出来
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涂鸦Ｙ

金虫 (初入文坛)

[求助] 转基因检测怎么一直P不出来

我在做小麦的转基因检测，已经是T5代了，但是PCR检测一直P不出来，梯度、Touch down、Touch up 都用过了还是不行，换了两对引物也还是不行，请各位大虾支个招吧，万分感谢！！！
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1楼 2013-01-17 20:44:17
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bired

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把T4代的种子来测，还有你的材料一直是你做下来的吗？
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2楼2013-01-18 10:22:11
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涂鸦Ｙ

金虫 (初入文坛)
内容已删除
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3楼2013-01-19 17:08:37
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loveerobin

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

T3代接手的时候就应该检测一下
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4楼2013-01-21 08:36:42
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lanqingkuo

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

加对照，换筛选标记引物
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战斗吧，朋友
5楼2013-01-21 14:19:18
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涂鸦Ｙ

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lanqingkuo at 2013-01-21 14:19:18
加对照，换筛选标记引物

您好，如何选择筛选标记引物
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6楼2013-01-21 17:55:17
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lanqingkuo

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不知道你的转化体包括什么筛选标记基因，一般有35s、nos、bar、pat、npt2等基因，可以试一下，找找问题在哪里？
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战斗吧，朋友
7楼2013-01-22 10:24:14
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涂鸦Ｙ

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lanqingkuo at 2013-01-22 10:24:14
不知道你的转化体包括什么筛选标记基因，一般有35s、nos、bar、pat、npt2等基因，可以试一下，找找问题在哪里？

好的，我试下，非常感谢
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8楼2013-01-22 11:10:32
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11071120

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

先筛选连的标记把，你筛的是苗吧，你要是确定你筛的一定是转基因苗的后代的话，筛不出来试试把DNA稍微稀释下，再试试，或者出现那种转基因片段突然缺失的现象，这就没有办法了，只能大量种，大量筛，一两百的量应该是远远不够的，不知道你的转基因方法是什么，有一些转基因方法是很难坚持到T4代的
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为了对于未知的追寻，我从无尽的黑暗中归来！手中的剑，从未放下！
9楼2013-01-24 08:59:43
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magy2006

木虫 (著名写手)
我只能说你很悲剧。
如果前任把材料搞混了，野生型当成了转基因给你做，做死也不可能得到理想结果啊。
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10楼2013-01-24 13:18:13
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