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涂鸦Y

金虫 (初入文坛)

[求助] 转基因检测怎么一直P不出来

我在做小麦的转基因检测,已经是T5代了,但是PCR检测一直P不出来,梯度、Touch down、Touch up 都用过了还是不行,换了两对引物也还是不行,请各位大虾支个招吧,万分感谢!!!
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bired

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
把T4代的种子来测,还有你的材料一直是你做下来的吗?
2楼2013-01-18 10:22:11
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涂鸦Y

金虫 (初入文坛)

内容已删除
3楼2013-01-19 17:08:37
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loveerobin

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

T3代接手的时候就应该检测一下
4楼2013-01-21 08:36:42
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lanqingkuo

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

加对照,换筛选标记引物
战斗吧,朋友
5楼2013-01-21 14:19:18
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涂鸦Y

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by lanqingkuo at 2013-01-21 14:19:18
加对照,换筛选标记引物

您好,如何选择筛选标记引物
6楼2013-01-21 17:55:17
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lanqingkuo

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不知道你的转化体包括什么筛选标记基因,一般有35s、nos、bar、pat、npt2等基因,可以试一下,找找问题在哪里?
战斗吧,朋友
7楼2013-01-22 10:24:14
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涂鸦Y

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by lanqingkuo at 2013-01-22 10:24:14
不知道你的转化体包括什么筛选标记基因,一般有35s、nos、bar、pat、npt2等基因,可以试一下,找找问题在哪里?

好的,我试下,非常感谢
8楼2013-01-22 11:10:32
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11071120

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

先筛选连的标记把,你筛的是苗吧,你要是确定你筛的一定是转基因苗的后代的话,筛不出来试试把DNA稍微稀释下,再试试,或者出现那种转基因片段突然缺失的现象,这就没有办法了,只能大量种,大量筛,一两百的量应该是远远不够的,不知道你的转基因方法是什么,有一些转基因方法是很难坚持到T4代的
为了对于未知的追寻,我从无尽的黑暗中归来!手中的剑,从未放下!
9楼2013-01-24 08:59:43
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magy2006

木虫 (著名写手)

我只能说你很悲剧。
如果前任把材料搞混了,野生型当成了转基因给你做,做死也不可能得到理想结果啊。
10楼2013-01-24 13:18:13
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