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cai3110274

木虫 (职业作家)

[求助] real-time PCR求助

最近做real-time PCR,遇到一些问题 ,希望会的虫友帮忙解答一下
1. 标准曲线的R2大于0.999,但是曲线斜率偏小,扩增效率大于100%, 融解曲线情况良好 没有引物二聚体,这是为什么呢 ?
2. 还有就是在阴性对照中也会出现扩增,但都在CT大于35(目的片段CT在15~25之间),是不是因为这个扩增导致了 扩增效率的增大?该怎么去除呢?
3. 我看到有人说扩增效率在  90~110之间都可以接受,阴性对照在35循环后出现扩增可以忽略不计,不知道有什么参考文献可以给出吗?

希望知道的虫友可以不吝赐教,非常感谢!
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reninhat

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道用的是谁家的PCR仪和管子啊
9楼2013-01-13 17:12:29
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reninhat

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by cai3110274 at 2013-01-14 07:54:40
都是AB的 呵呵...

有空试试我家自己造的管子吧。
http://www.gsbio.cn/
刚刚和杭州艾力康、302、福州泰普签约供管子了
价格便宜量又足
13楼2013-01-14 13:38:39
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