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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

[求助] 构建载体中遇到问题,请大家多多指教

我想构建一个载体用于自己的实验,这个载体的复制子和复制蛋白来源于pKD46质粒,而抗性基因,蔗糖致死筛选标记和多克隆位点来源于另外的质粒pEX18Tc,复制子那一段长度为1600多bp,抗性基因那一段5000多bp,可是现在我构建了三个多月了仍然没有构建成功,我用的是NcoI和XhoI这两个内切酶,求高手指点一下我哪个地方有问题吧,我个人感觉应该不是酶切连接转化的问题,但是又找不出原因来,我会将我两个载体选取的区域附在下面,请大家帮我看一下是否有问题。
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ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没有构建成功是停在哪一步了呢
酶切连接转化都没找到问题的话就从第一步开始确认:确认使用的初始质粒是对的
2楼2013-01-10 05:59:33
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stardu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你好!你的这个我不清楚,你上次回答过我提的替换pKD46上抗性的问题,我还是没有最终连接上。之后我又追问了几个问题你可能没看到,你能去我的那个帖子回答一下么?万分感谢你!下面是网址:" target="_blank">http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5361486
3楼2013-01-10 09:02:11
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