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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 构建载体中遇到问题，请大家多多指教
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

[求助] 构建载体中遇到问题，请大家多多指教

我想构建一个载体用于自己的实验，这个载体的复制子和复制蛋白来源于pKD46质粒，而抗性基因，蔗糖致死筛选标记和多克隆位点来源于另外的质粒pEX18Tc，复制子那一段长度为1600多bp，抗性基因那一段5000多bp，可是现在我构建了三个多月了仍然没有构建成功，我用的是NcoI和XhoI这两个内切酶，求高手指点一下我哪个地方有问题吧，我个人感觉应该不是酶切连接转化的问题，但是又找不出原因来，我会将我两个载体选取的区域附在下面，请大家帮我看一下是否有问题。
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1楼 2013-01-09 16:12:22
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ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没有构建成功是停在哪一步了呢
酶切连接转化都没找到问题的话就从第一步开始确认：确认使用的初始质粒是对的
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2楼2013-01-10 05:59:33
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stardu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你好！你的这个我不清楚，你上次回答过我提的替换pKD46上抗性的问题，我还是没有最终连接上。之后我又追问了几个问题你可能没看到，你能去我的那个帖子回答一下么？万分感谢你！下面是网址：" target="_blank">http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5361486
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3楼2013-01-10 09:02:11
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