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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 两个不同蛋白都挂不上ni柱
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sdXP0927

新虫 (初入文坛)

[求助] 两个不同蛋白都挂不上ni柱


最近纯化蛋白，两个不同的蛋白，一个是His 标签的，一个是Trx标签的（也带有6个his），可是从SDS/PAGE上看，都没有挂上ni柱
而其他人用过我用的ni柱，都挺好用的
师兄说可能是蛋白把his包起来了所以挂不上……可是两个不同的蛋白，为什么都是这样的状况？除了师兄说的那种可能，还有哪些可能的原因？
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1楼 2013-01-07 20:50:42
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王家大成

木虫 (正式写手)

囧囧小虫

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2013-01-08 22:39:38
首先确定你插入基因的时候是正确的，也就是能够表达出后面的组氨酸尾巴；然后要确定的是它真的表达了；它表达后是否降解了。
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一念起，万水千山；一念灭，沧海桑田！
2楼2013-01-08 16:40:50
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sdXP0927

新虫 (初入文坛)
★
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2013-01-08 22:39:45
引用回帖:
2楼: Originally posted by 王家大成 at 2013-01-08 16:40:50
首先确定你插入基因的时候是正确的，也就是能够表达出后面的组氨酸尾巴；然后要确定的是它真的表达了；它表达后是否降解了。

基因是没错的，筛选后测过序了。跑胶时条带的位置也是对的，可是就是挂不上柱子，师兄也在怀疑可能不是我的目的蛋白……那个条带挺明显的，不过没有跑诱导前的样作对比
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3楼2013-01-08 22:38:23
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sdXP0927

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 王家大成 at 2013-01-08 16:40:50
首先确定你插入基因的时候是正确的，也就是能够表达出后面的组氨酸尾巴；然后要确定的是它真的表达了；它表达后是否降解了。

对了，那个TRX标签的确实在洗脱液里看不到目的条带，但是在更小的位置上有两个紧挨着条带，师兄说可能是空载的TRX 标签蛋白，但明明测序是正确的，并且即使一个是标签蛋白，那另一条带是什么呢？
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4楼2013-01-08 22:41:30
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极道始之魔

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这个我也想知道， 也遇到了同样的问题，别人也能挂上，我的挂不上，不知道是不是因为目的基因前面带有起始密码子的原因，基因从这里开始翻译，压根就没有脸上his标签，别人用的是pet-28a载体的挂上了，楼主用的生命载体
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5楼2013-10-08 15:53:05
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