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匿名

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txw87

木虫 (小有名气)



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哦,明白你意思了。你是要用p出来的产物继续研究是吧?
如果你不差钱,去合成含LNA的引物吧,因为你想通过单碱基差异来实现区分扩增,普通引物很难,而含LNA的引物可以做到单碱基差异使Tm值差5度左右,你就可以通过改变Tm值实现区分扩增了
8楼2013-01-04 21:21:21
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飞天168

银虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主,给你推荐几篇文献吧!是利用3‘端末尾两个碱基错配来设计引物的
A Simple Procedure for the Analysis of Single
Nucleotide Polymorphisms Facilitates Map-Based
Cloning in Arabidopsis
9楼2013-01-05 08:34:34
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txw87

木虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-04 20:01:28
同学,请问你要检测的是突变还是SNP?
如果是突变,因为突变的比率较低,利用普通PCR检测是不现实的。
如果是SNP,也不建议使用普通PCR检测,你完全可以利用普通PCR扩增共同的片度,再使用sanger测序来进行分型,sanger测序一个样本也不是很贵,30-50吧。
2楼2013-01-04 10:57:20
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yasmineross

铁虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
除非使用试剂盒,不然用普通的引物很难扩增出单碱基突变,因为普通的引物是混合物。
3楼2013-01-04 12:16:30
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匿名

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4楼2013-01-04 14:23:50
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zhang881007

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
简单点,直接测序才20几块钱就可以了。别玩其他花样了,而且不省钱!
5楼2013-01-04 15:33:25
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匿名

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6楼2013-01-04 16:43:10
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ccharlien

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 回帖置顶 2013-01-04 20:01:35
没做过 不过比较难做
多找些ARMS-PCR的文章看看别人怎么优化的吧 祝好运
7楼2013-01-04 19:48:06
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hupeng

铁虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我现在也做这方面,试过多对引物,结果都不稳定,苦恼中。。。

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10楼2013-01-17 20:58:58
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匿名

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送鲜花一朵
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11楼2013-01-18 09:55:49
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淆之战

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果楼主还是比较有钱的话,建议购买PNA,对野生型进行抑制,设计针对突变型特异性的探针进行检测。灵敏度可以达到1/1000。
12楼2013-05-26 20:37:22
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