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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 单个碱基突变的PCR条件如何优化
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匿名

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1楼 2013-01-04 10:25:35
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txw87

木虫 (小有名气)
★
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哦，明白你意思了。你是要用p出来的产物继续研究是吧？
如果你不差钱，去合成含LNA的引物吧，因为你想通过单碱基差异来实现区分扩增，普通引物很难，而含LNA的引物可以做到单碱基差异使Tm值差5度左右，你就可以通过改变Tm值实现区分扩增了
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8楼2013-01-04 21:21:21
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飞天168

银虫 (初入文坛)
★
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楼主，给你推荐几篇文献吧！是利用3‘端末尾两个碱基错配来设计引物的
A Simple Procedure for the Analysis of Single
Nucleotide Polymorphisms Facilitates Map-Based
Cloning in Arabidopsis
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9楼2013-01-05 08:34:34
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txw87

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-04 20:01:28
同学，请问你要检测的是突变还是SNP？
如果是突变，因为突变的比率较低，利用普通PCR检测是不现实的。
如果是SNP，也不建议使用普通PCR检测，你完全可以利用普通PCR扩增共同的片度，再使用sanger测序来进行分型，sanger测序一个样本也不是很贵，30-50吧。
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2楼2013-01-04 10:57:20
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yasmineross

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
除非使用试剂盒，不然用普通的引物很难扩增出单碱基突变，因为普通的引物是混合物。
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3楼2013-01-04 12:16:30
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匿名

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4楼2013-01-04 14:23:50
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zhang881007

金虫 (小有名气)
★
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简单点，直接测序才20几块钱就可以了。别玩其他花样了，而且不省钱！
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5楼2013-01-04 15:33:25
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匿名

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6楼2013-01-04 16:43:10
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ccharlien

木虫 (正式写手)
★
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amisking: 回帖置顶 2013-01-04 20:01:35
没做过 不过比较难做
多找些ARMS-PCR的文章看看别人怎么优化的吧 祝好运
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7楼2013-01-04 19:48:06
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hupeng

铁虫 (初入文坛)
★
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我现在也做这方面，试过多对引物，结果都不稳定，苦恼中。。。
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大-木-虫
10楼2013-01-17 20:58:58
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匿名

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11楼2013-01-18 09:55:49
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淆之战

新虫 (初入文坛)
★
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如果楼主还是比较有钱的话，建议购买PNA，对野生型进行抑制，设计针对突变型特异性的探针进行检测。灵敏度可以达到1/1000。
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12楼2013-05-26 20:37:22
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