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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 单个碱基突变的PCR条件如何优化
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匿名

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1楼 2013-01-04 10:25:35
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txw87

木虫 (小有名气)
★
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哦，明白你意思了。你是要用p出来的产物继续研究是吧？
如果你不差钱，去合成含LNA的引物吧，因为你想通过单碱基差异来实现区分扩增，普通引物很难，而含LNA的引物可以做到单碱基差异使Tm值差5度左右，你就可以通过改变Tm值实现区分扩增了
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8楼2013-01-04 21:21:21
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txw87

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-04 20:01:28
同学，请问你要检测的是突变还是SNP？
如果是突变，因为突变的比率较低，利用普通PCR检测是不现实的。
如果是SNP，也不建议使用普通PCR检测，你完全可以利用普通PCR扩增共同的片度，再使用sanger测序来进行分型，sanger测序一个样本也不是很贵，30-50吧。
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2楼2013-01-04 10:57:20
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yasmineross

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
除非使用试剂盒，不然用普通的引物很难扩增出单碱基突变，因为普通的引物是混合物。
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3楼2013-01-04 12:16:30
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匿名

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4楼2013-01-04 14:23:50
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