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wjb6681393

金虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR还会不会因为使用的是低拷贝载体而导致不能获得相应的条带??

做了好几次转化,用的是PMA5载体,是低拷贝,抗性平板长得菌落做菌落PCR总是没有条带,阳性对照跟阴性对照都做了……
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为了梦想……
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freerain

禁虫 (职业作家)

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2楼2012-12-30 19:44:03
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lg995ft

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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wjb6681393: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2012-12-31 19:19:22
不要死吊在菌落PCR上面,细胞成分复杂,不是那个质粒都可以做,提质粒也不是太复杂

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2012-12-30 23:16:27
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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不会的。质粒拷贝数再低也比基因组拷贝数高吧。如果实在不好P就不要用菌落PCR了,把克隆的步骤做仔细,阳性克隆的概率也会很高的,直接提质粒分析。
4楼2012-12-31 06:41:38
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

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不会的,跟拷贝多少没关系,这种情况下就没必要再菌落PCR了,个人一直不推崇菌落PCR费时费力还不准确,直接提质粒酶切多简洁高效.
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
5楼2012-12-31 10:19:59
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lg995ft

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

不要死吊在菌落PCR上面,细胞成分复杂,不是那个质粒都可以做,提质粒也不是太复杂

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2012-12-31 13:22:36
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pengyun2521

木虫 (正式写手)

尝试一下其他的方法,菌落PCR做检测还好咯
不积跬步无以至千里!
7楼2013-01-02 00:07:42
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