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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌落PCR还会不会因为使用的是低拷贝载体而导致不能获得相应的条带？？
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wjb6681393

金虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR还会不会因为使用的是低拷贝载体而导致不能获得相应的条带？？

做了好几次转化，用的是PMA5载体，是低拷贝，抗性平板长得菌落做菌落PCR总是没有条带，阳性对照跟阴性对照都做了……
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为了梦想……
1楼 2012-12-30 17:54:01
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freerain

禁虫 (职业作家)
感谢参与，应助指数 +1
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2楼2012-12-30 19:44:03
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lg995ft

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wjb6681393: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2012-12-31 19:19:22
不要死吊在菌落PCR上面，细胞成分复杂，不是那个质粒都可以做，提质粒也不是太复杂

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2012-12-30 23:16:27
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不会的。质粒拷贝数再低也比基因组拷贝数高吧。如果实在不好P就不要用菌落PCR了，把克隆的步骤做仔细，阳性克隆的概率也会很高的，直接提质粒分析。
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4楼2012-12-31 06:41:38
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不会的，跟拷贝多少没关系，这种情况下就没必要再菌落PCR了，个人一直不推崇菌落PCR费时费力还不准确，直接提质粒酶切多简洁高效.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
5楼2012-12-31 10:19:59
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lg995ft

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

不要死吊在菌落PCR上面，细胞成分复杂，不是那个质粒都可以做，提质粒也不是太复杂

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2012-12-31 13:22:36
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pengyun2521

木虫 (正式写手)
尝试一下其他的方法，菌落PCR做检测还好咯
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不积跬步无以至千里！
7楼2013-01-02 00:07:42
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