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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 目的基因的导入
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sunxin2012

铜虫 (小有名气)

[求助] 目的基因的导入

各位前辈，有哪位对转基因十分熟悉的，希望帮忙解决以下问题。
1、目的基因导入受体细胞，有必要带着完整的载体吗？可不可以在构建完整的表达载体之后，进行酶切，使其带有完整的表达框和部分载体进行转化，会不会影响以后的表达？
2、双基因表达载体的构建，能否给个大体步骤？
3、如果转化效率低，原因可能有哪些？
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Saveyourheartforsomeonewhocares.把心留给在乎你的人吧。
1楼 2012-12-18 20:08:38
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
导入受体细胞还是要有完整的载体的，一段很不容易转进去，至于成功的概率还是很大的，十分之七八吧
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让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
4楼2012-12-19 10:38:26
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-19 17:34:34
如果你要把目的基因放在质粒上表达而不整合到宿主染色体上去的话，必需有完整的表达载体。否则DNA片段进去了也不能进行复制。
转化效率低有很多原因。一个是本身宿主的感受性差。还有可能是宿主有较强活性的未知限制性酶把外源DNA切掉了。
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2楼2012-12-19 09:04:36
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
双基因表达载体的构建，没有什么特殊的，只不过其有两个独立的promoter-RBS-MCS系统，构建的时候，做两次连接，方法和单基因表达载体构建是一样的。
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Thank-you，so-blue.
3楼2012-12-19 10:11:56
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sekiwang

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
导入受体细胞还是要有完整的载体的，一段很不容易转进去，至于成功的概率还是很大的，十分之七八吧

有道理
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5楼2012-12-19 10:53:00
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