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chem_dgy

铜虫 (小有名气)

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[交流] 质谱分析蛋白质的问题

求高人指点，用EESI-MS测定大分子量蛋白质的常用溶剂，萃取剂，以及试验相关的各个参数，以供参考。

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1楼 2012-12-11 21:34:33

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organicsuper

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xbqewpq: 金币+1, 鼓励交流~~ 2012-12-12 20:28:32

常用溶剂也还是做ESI用的那几种,水甲,醇,甲酸,乙酸等,

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valley_chow

2楼2012-12-11 23:45:55

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valley_chow

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chem_dgy: 金币+5 2012-12-12 21:18:39

引用回帖:

2楼: Originally posted by organicsuper at 2012-12-11 23:45:55
常用溶剂也还是做ESI用的那几种,水甲,醇,甲酸,乙酸等,

溶剂就是水,甲醇,乙腈，离子对试剂就是甲酸,乙酸,氨水,TFA

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3楼2012-12-12 11:00:57

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organicsuper

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xbqewpq: 金币+1, 鼓励发帖交流~~ 2012-12-12 20:28:48
chem_dgy: 金币+5 2012-12-12 21:18:33

有个简单的纯化方法就是用反相膜萃取蛋白质溶液,然后用水洗反相膜,再用做质谱的溶剂洗从反相膜上洗下来,就可以进样了.

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4楼2012-12-12 13:30:02

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cory0931

至尊木虫 (文坛精英)

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2-de飘过

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5楼2012-12-12 13:55:47

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organicsuper

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chem_dgy: 金币+5 2012-12-12 21:18:25

复杂的,就有凝胶电泳.毛细管电泳,HPLC等,都要自己摸索条件的,不同的蛋白质性质是不同的哈.

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6楼2012-12-12 19:46:57

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cpn

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chem_dgy: 金币+5 2012-12-13 11:10:51

蛋白质没有所谓的萃取剂吧？看你样品的状态，如果是高盐溶液，必须要除盐，除盐用HPLC C4，C8柱或者用milipore的ziptip C18富集蛋白，有一套通用的procedure。ESI必须要除难挥发性盐除的很干净，否则不仅信号很糟糕，还污染质谱。
溶剂一般是50%H2O，50%ACN或MeOH，再加0.1%甲酸帮助离子化。当然如果你的蛋白对酸非常不稳定的话，也可以考虑是不是要加点挥发性缓冲盐。

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7楼2012-12-13 09:04:16

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