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chem_dgy

铜虫 (小有名气)


[交流] 质谱分析蛋白质的问题

求高人指点,用EESI-MS测定大分子量蛋白质的常用溶剂,萃取剂,以及试验相关的各个参数,以供参考。
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organicsuper

木虫 (正式写手)


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xbqewpq: 金币+1, 鼓励交流~~ 2012-12-12 20:28:32
常用溶剂也还是做ESI用的那几种,水甲,醇,甲酸,乙酸等,

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2楼2012-12-11 23:45:55
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valley_chow

金虫 (正式写手)


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送鲜花一朵
chem_dgy: 金币+5 2012-12-12 21:18:39
引用回帖:
2楼: Originally posted by organicsuper at 2012-12-11 23:45:55
常用溶剂也还是做ESI用的那几种,水甲,醇,甲酸,乙酸等,

溶剂就是水,甲醇,乙腈,离子对试剂就是甲酸,乙酸,氨水,TFA
3楼2012-12-12 11:00:57
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organicsuper

木虫 (正式写手)


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xbqewpq: 金币+1, 鼓励发帖交流~~ 2012-12-12 20:28:48
chem_dgy: 金币+5 2012-12-12 21:18:33
有个简单的纯化方法就是用反相膜萃取蛋白质溶液,然后用水洗反相膜,再用做质谱的溶剂洗从反相膜上洗下来,就可以进样了.
4楼2012-12-12 13:30:02
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cory0931

至尊木虫 (文坛精英)


2-de飘过
5楼2012-12-12 13:55:47
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organicsuper

木虫 (正式写手)


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chem_dgy: 金币+5 2012-12-12 21:18:25
复杂的,就有凝胶电泳.毛细管电泳,HPLC等,都要自己摸索条件的,不同的蛋白质性质是不同的哈.
6楼2012-12-12 19:46:57
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cpn

木虫 (正式写手)


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chem_dgy: 金币+5 2012-12-13 11:10:51
蛋白质没有所谓的萃取剂吧?看你样品的状态,如果是高盐溶液,必须要除盐,除盐用HPLC C4,C8柱或者用milipore的ziptip C18富集蛋白,有一套通用的procedure。ESI必须要除难挥发性盐除的很干净,否则不仅信号很糟糕,还污染质谱。
溶剂一般是50%H2O,50%ACN或MeOH,再加0.1%甲酸帮助离子化。当然如果你的蛋白对酸非常不稳定的话,也可以考虑是不是要加点挥发性缓冲盐。
7楼2012-12-13 09:04:16
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organicsuper

木虫 (正式写手)



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看看好,是C2,C8的反相膜,老兄.
8楼2012-12-13 12:55:26
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landsky

铜虫 (著名写手)


9楼2013-03-26 16:05:54
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king9089

金虫 (小有名气)



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请问楼主是在哪里做的质谱分析蛋白样品?
10楼2013-07-07 13:46:29
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冰童

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看看这个吧,我是按这个来的。

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11楼2014-06-11 21:46:29
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