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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 双向电泳如何加入marker，是否控制温度
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竹林里的小蛇

银虫 (小有名气)

[交流] 双向电泳如何加入marker，是否控制温度 已有4人参与

请教各位虫友，蛋白双向电泳怎么加入maker呢？温度要控制吗？小弟第一次做双向电泳，还不是很懂，望大家不吝赐教。
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1楼 2012-12-10 10:19:49
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你指IEF时候的pH marker吗？需要买marker，按照说明用了跑胶条。
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2楼2012-12-10 15:03:19
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竹林里的小蛇

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-10 15:03:19
你指IEF时候的pH marker吗？需要买marker，按照说明用了跑胶条。

不是啊，是第二向SDS-PAGE的marker， 是怎么上到胶里面的？
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3楼2012-12-10 16:16:38
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
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竹林里的小蛇: 回帖置顶 2012-12-11 11:00:55
就像是做普通SDS的胶那样呀。你跑第二项的梳子是否有marker点样孔？如果有的话不用说明了吧。如果没有，可以把marker点在3MM滤纸上，等干了以后用0.5%的琼脂糖固定在浓缩胶上面（与固定IEF胶条相同）。
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4楼2012-12-11 08:33:00
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western虫

金虫 (小有名气)
★
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原来滤纸也能这么有用~~~
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ForDream！
5楼2012-12-11 10:31:58
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竹林里的小蛇

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-11 08:33:00
就像是做普通SDS的胶那样呀。你跑第二项的梳子是否有marker点样孔？如果有的话不用说明了吧。如果没有，可以把marker点在3MM滤纸上，等干了以后用0.5%的琼脂糖固定在浓缩胶上面（与固定IEF胶条相同）。

谢谢啊，
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6楼2012-12-11 11:00:34
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
将10微升的蛋白预染marker滴在直径大概5毫米的滤纸上，晾干。等将IEF胶条转移到SDS-Page胶上的时候，顺便将这块带有Marker的滤纸加到胶的一侧。电泳时的温度一般设在17℃。
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天道酬勤
7楼2012-12-12 15:46:32
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竹林里的小蛇

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wchuangqi at 2012-12-12 15:46:32
将10微升的蛋白预染marker滴在直径大概5毫米的滤纸上，晾干。等将IEF胶条转移到SDS-Page胶上的时候，顺便将这块带有Marker的滤纸加到胶的一侧。电泳时的温度一般设在17℃。

谢谢
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8楼2012-12-12 20:27:23
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lili870818

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问如何纯化蛋白使其更易应用于双向电泳，不用2D clean-up试剂盒
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9楼2013-07-17 16:55:52
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竹林里的小蛇

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lili870818 at 2013-07-17 16:55:52
请问如何纯化蛋白使其更易应用于双向电泳，不用2D clean-up试剂盒

为什么不用clean-up试剂盒呢，bio-rad或者GE的都行啊
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10楼2013-07-19 09:49:28
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