| 查看: 19099 | 回复: 10 | ||||||||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||||||||
我是传奇456金虫 (正式写手)
|
[求助]
求关于Overlap PCR(重叠延伸PCR)的具体实验过程及原理
|
|||||||||
|
求关于Overlap PCR(重叠延伸PCR)的具体实验过程及原理，最好是文献或者书籍章节，中英文都可以~ [ 来自科研家族 外貌协会 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 | 核酸生物学实验经验 | 【分子生物】EPI帖 | 核酸方面 |
| 因为专注所以专业 | 技术支持 | 文献阅读方法 | 分子生物学 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有109人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助求助！！！不同大鼠的同一基因的荧光定量实时PCR实验是否需要设计不同的引物
已经有8人回复
- 农杆菌菌液pcr实验过程
已经有11人回复
- overlap PCR之问题
已经有16人回复
- 求PCR实验流程，小弟是个新手求高手相助
已经有9人回复
- overlap PCR做不出来呐。。。。
已经有23人回复
- 做过overlap PCR的虫子过来看看
已经有19人回复
- A noob intersted in SCI searching for help(about overlap PCR)
已经有4人回复
- 【求助/交流】RFLP实验中菌落PCR分析
已经有6人回复
- 【求助/交流】PCR产物杂带很多，主带很弱。如何进行下一步实验？
已经有8人回复
- 【求助/交流】从RNA到cDNA合成再到克隆PCR的实验技巧和操作细节问题若干，寻求解答
已经有12人回复
- 【求助/交流】PCR产物与T载体的连接的实验原理？
已经有5人回复
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+5, MolEPI+1, very good 2012-12-03 16:55:36
我是传奇456: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 很好，很详细。 2012-12-03 20:33:29
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+5, MolEPI+1, very good 2012-12-03 16:55:36
我是传奇456: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 很好，很详细。 2012-12-03 20:33:29
|
重叠延伸PCR，我觉得可以分两种： 第一种：用重叠延伸PCR做定点突变，采用重叠引物延伸PCR介导做定点突变实际上是一种快速高效的在基因中特定位点引入特定突变的有效技术。其基本原理就是采用具有互补末端的引物，使PCR产物形成了一小段的重叠链, 然后在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸，将不同来源的扩增片段重叠拼接起来。 该技术主要包括以下几步： (1) 设计引物，PCR扩增基因两端 (2) 回收两端片段 (3) 两端片段退火延伸，扩增全长基因 1. 引物设计 重叠延伸PCR做定点突变引物的设计，如下图所示。 引物F及R为基因两端特异引物，其中Fm及Rm为中间引物。其中引物Fm及Rm中间共享一段序列（至少10bp完全匹配），*为突变点，突变点最好是位于引物的5’端，尽量避免出现在3’端。然后分别用引物F和Rm及Fm和R进行配对进行PCR。该步一定要用pfu酶，不能用Taq酶，因为Taq酶容易在PCR产物末端加A，会造成产物移码突变。 2. 分别回收第1步所得两条PCR产物 3. 将第2步所得两份PCR产物进行混合使其互为模板及引物，加入dNTP及Pfu或Taq酶及引物F和R进行PCR扩增出具有突变的全基因。  第二种：用重叠延伸PCR做序列缺失突变，即重叠延伸PCR技术(gene splicing by overlap extension PCR,简称SOE PCR) 以下是重叠延伸PCR的原理及两基因的引物设计： （1）引物设计：引物a和d是常规引物；b的左半段为常规引物，右半段为基因Ⅱ的引物序列；c同理；则b和c的部分碱基可互补配对。 （2）基因I、Ⅱ分别扩增，产物相应为片段ab和cd。 （3）两种产物混合，经变性及退火处理，a链和d链部分碱基互补配对，成杂交链。在DNA polymerase作用下，a和d链互为引物和模板，合成出长'链，即为基因I和基因Ⅱ的接接产物。   2012-12-03_160715.jpg |
2楼2012-12-03 16:45:55
|
本帖内容被屏蔽 |
3楼2012-12-03 19:36:36
Yummyoo
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1083.3
- 帖子: 111
- 在线: 221.3小时
- 虫号: 1993621
- 注册: 2012-09-11
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
4楼2013-03-17 20:22:35
5楼2013-04-22 17:02:14
海妖贝壳
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2810.5
- 散金: 100
- 红花: 3
- 帖子: 601
- 在线: 596.7小时
- 虫号: 1855178
- 注册: 2012-06-11
- 性别: GG
- 专业: 膜生物化学与膜生物物理学
6楼2013-05-14 16:22:43
xmckyltwx
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2530.8
- 红花: 1
- 帖子: 419
- 在线: 149.6小时
- 虫号: 1093954
- 注册: 2010-09-09
- 性别: MM
- 专业: 器官移植与移植免疫
7楼2013-06-14 15:55:08
8楼2013-06-16 10:41:51
9楼2013-11-20 17:58:45
10楼2013-12-18 11:46:35
20