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1楼 2012-11-30 19:27:36

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weigh1111

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5楼: Originally posted by aoda123 at 2012-12-01 15:33:17
质谱能确定蛋白胶中条带的蛋白分子量吗？...

能啊，用maldi-tof就能知道蛋白质的分子量啊~

6楼2012-12-01 16:13:38

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cicelyzh

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4楼: Originally posted by aoda123 at 2012-12-01 15:32:32
我想把蛋白电泳胶切下来送去做质谱，看一下表达条带是不是目的条带...

想看表达条带是否正确，先从分子量上大致判断。你表达的蛋白如果有标签，可以做Western进一步判断。

7楼2012-12-02 03:19:22

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8楼: Originally posted by aoda123 at 2012-12-02 15:07:32
表达出来的蛋白比理论值大了十几KD，构建的质粒测序也合适。做出来的western blot 又出现了其他条带。就是不能确定表达的是不是目的条带...

大十几KD的确有些不正常。如果带标签可以看看能否纯化出来。当然你切带打个质谱也是不错的选择。

9楼2012-12-03 02:58:24

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xiangquanju

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小丹木木: 金币+2, 股了交流 2012-12-03 16:36:58

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你的蛋白还有二硫键么，我之前看过一篇文献，写的是一个蛋白的的氧化态比还原态在SDS胶上要移动的慢一些，但是因为你的只有一条条带的话，就不太好说。
所以最好最好做个质谱检测一下。
直接用刀片将目的条带切下来，再和你要去做质谱的地方联系一下，需要怎么处理样品。我之前做的就直接将切下来的样品送过去就是了

10楼2012-12-03 13:41:29

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lanziliuli

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做串联质谱的话，蛋白还是要纯的，复杂度不能太高，不然就要做LC-MSMS

做好科研

11楼2012-12-06 10:38:58

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我想很多人都做过，不知道你要问什么。

2楼2012-12-01 08:34:15

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额……没见你的问题啊……好歹把遇到的问题写在帖子里啊……

3楼2012-12-01 13:27:55

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2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-01 08:34:15
我想很多人都做过，不知道你要问什么。

我想把蛋白电泳胶切下来送去做质谱，看一下表达条带是不是目的条带

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4楼2012-12-01 15:32:32

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3楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-12-01 13:27:55
额……没见你的问题啊……好歹把遇到的问题写在帖子里啊……

质谱能确定蛋白胶中条带的蛋白分子量吗？

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5楼2012-12-01 15:33:17

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7楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-02 03:19:22
想看表达条带是否正确，先从分子量上大致判断。你表达的蛋白如果有标签，可以做Western进一步判断。...

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