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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS蛋白电泳胶的质谱检测问题
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aoda123

木虫 (正式写手)

[求助] SDS蛋白电泳胶的质谱检测问题

哪位前辈做过SDS蛋白电泳胶的质谱？
请赐教！！！
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身体健康，工作顺利
1楼 2012-11-30 19:27:36
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by aoda123 at 2012-12-01 15:33:17
质谱能确定蛋白胶中条带的蛋白分子量吗？...

能啊，用maldi-tof就能知道蛋白质的分子量啊~
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6楼2012-12-01 16:13:38
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by aoda123 at 2012-12-01 15:32:32
我想把蛋白电泳胶切下来送去做质谱，看一下表达条带是不是目的条带...

想看表达条带是否正确，先从分子量上大致判断。你表达的蛋白如果有标签，可以做Western进一步判断。
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7楼2012-12-02 03:19:22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by aoda123 at 2012-12-02 15:07:32
表达出来的蛋白比理论值大了十几KD，构建的质粒测序也合适。做出来的western blot 又出现了其他条带。就是不能确定表达的是不是目的条带...

大十几KD的确有些不正常。如果带标签可以看看能否纯化出来。当然你切带打个质谱也是不错的选择。
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9楼2012-12-03 02:58:24
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xiangquanju

金虫 (小有名气)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 股了交流 2012-12-03 16:36:58
引用回帖:
8楼: Originally posted by aoda123 at 2012-12-02 15:07:32
表达出来的蛋白比理论值大了十几KD，构建的质粒测序也合适。做出来的western blot 又出现了其他条带。就是不能确定表达的是不是目的条带...

你的蛋白还有二硫键么，我之前看过一篇文献，写的是一个蛋白的的氧化态比还原态在SDS胶上要移动的慢一些，但是因为你的只有一条条带的话，就不太好说。
所以最好最好做个质谱检测一下。
直接用刀片将目的条带切下来，再和你要去做质谱的地方联系一下，需要怎么处理样品。我之前做的就直接将切下来的样品送过去就是了
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10楼2012-12-03 13:41:29
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lanziliuli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

做串联质谱的话，蛋白还是要纯的，复杂度不能太高，不然就要做LC-MSMS
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做好科研
11楼2012-12-06 10:38:58
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我想很多人都做过，不知道你要问什么。
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2楼2012-12-01 08:34:15
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
额……没见你的问题啊……好歹把遇到的问题写在帖子里啊……
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3楼2012-12-01 13:27:55
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aoda123

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-01 08:34:15
我想很多人都做过，不知道你要问什么。

我想把蛋白电泳胶切下来送去做质谱，看一下表达条带是不是目的条带
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身体健康，工作顺利
4楼2012-12-01 15:32:32
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aoda123

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-12-01 13:27:55
额……没见你的问题啊……好歹把遇到的问题写在帖子里啊……

质谱能确定蛋白胶中条带的蛋白分子量吗？
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身体健康，工作顺利
5楼2012-12-01 15:33:17
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aoda123

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-02 03:19:22
想看表达条带是否正确，先从分子量上大致判断。你表达的蛋白如果有标签，可以做Western进一步判断。...

表达出来的蛋白比理论值大了十几KD，构建的质粒测序也合适。做出来的western blot 又出现了其他条带。就是不能确定表达的是不是目的条带
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身体健康，工作顺利
8楼2012-12-02 15:07:32
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