应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于载体和pcr产物双酶切后的酶连问题
61/1返回列表
查看: 937  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

www790501

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于载体和pcr产物双酶切后的酶连问题

将载体质粒的多克隆位点（相距70bp左右）双酶切后，与同样进行过的双酶切产物进行酶连，它们之间量的比例如何？酶连效率怎样？我做了几次酶连后，转化大肠杆菌效果都不理想，一个转化子都没有长，不知道什么问题。请赐教！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

资料你快到我的碗里来

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-11-15 00:15:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fwcyue

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
www790501: 金币+1, ★有帮助 2012-11-15 19:19:07
我们实验室倾向于 (质粒用量*目标基因的大小)/ 质粒的大小*3=目的基因用量，转化效率比较高。
赞一下 回复此楼
2楼2012-11-15 00:35:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
www790501: 金币+1, ★有帮助 2012-11-15 19:19:20
你用的连接酶上有最佳比例，然后根据摩尔比算出体积比就OK了
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-15 08:51:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
www790501: 金币+1, ★有帮助 2012-11-15 19:19:35
目的片段：载体的分子数为3或4就可以了。一般载体用50ng，再根据载体和目的片段大小计算出目的片段的用量。
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-15 09:02:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
www790501: 金币+1, ★有帮助 2012-11-15 19:19:42
一般酶连的话，条带比较清晰可以考虑用1：3或1：4 ，700bp很好连，祝你好运
赞一下 回复此楼
一花一世界、一叶一菩提
5楼2012-11-15 15:19:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hourl11

禁虫 (初入文坛)
★
感谢参与，应助指数 +1
www790501: 金币+1, ★有帮助 2012-11-15 19:19:52
本帖内容被屏蔽
6楼2012-11-15 15:45:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 www790501 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭