应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于构建的双质粒菌，第一代摇菌培养就发现丢失质粒的问题
31/1返回列表
查看: 1452  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

gwdavid

木虫 (著名写手)

小木虫散兵坑坑长

[求助] 关于构建的双质粒菌，第一代摇菌培养就发现丢失质粒的问题

各位大神，最近在做双质粒构建，用的是PET28b和pACYCA载体，分别是氯霉素和四环素抗性，固体板和液体培养基用的都是30~50mg/ml的浓度。总共做了7个基因的表达，其中5种都成功了，摇菌扩大培养做菌落PCR后可见两种质粒扩增产物。但有两个基因，从固体板上挑的单菌落做PCR没有问题，但将单菌落整到液体培养基中培养后再P，怎么做都丢质粒，一个基因只能P出PET28b这个载体，另外一个基因两个质粒都P不出来。

我想请教的问题是：
1. 板和液体LB中都加了双抗性，如果丢了一个质粒怎么还可能生长呢？
2. 这第一代就丢质粒的情况，可能是什么原因呢？如何改善？

先谢谢各位了！
回复此楼

» 猜你喜欢
个人博客：[url]http://blog.sina.com.cn/gaiwei[/url]
1楼 2015-07-22 22:12:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (知名作家)
这两个质粒应该分别是卡那和氯霉素抗性

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2015-07-23 07:03:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄小萌萌

银虫 (小有名气)
问题解决了吗、我也遇到了这样的问题
赞一下 回复此楼
3楼2016-04-30 09:45:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gwdavid 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 WqtG0Aem8Ufl 2026-10-24 4/200 2026-10-25 20:14 by cLOojpOxkX0G
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 WqtG0Aem8Ufl 2026-10-24 3/150 2026-10-25 20:11 by cLOojpOxkX0G
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 WqtG0Aem8Ufl 2026-10-24 5/250 2026-10-25 20:07 by cLOojpOxkX0G
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 3xN9SualEUPt 2026-10-24 5/250 2026-10-25 20:01 by cLOojpOxkX0G
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 3xN9SualEUPt 2026-10-24 3/150 2026-10-25 14:23 by XiYP04It3Evb
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 3xN9SualEUPt 2026-10-24 4/200 2026-10-25 14:20 by XiYP04It3Evb
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 3xN9SualEUPt 2026-10-24 4/200 2026-10-25 14:07 by XiYP04It3Evb
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 3xN9SualEUPt 2026-10-24 4/200 2026-10-25 13:54 by XiYP04It3Evb
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 DI1qFHFK0KbE 2026-10-24 4/200 2026-10-25 13:28 by XiYP04It3Evb
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 DI1qFHFK0KbE 2026-10-24 4/200 2026-10-25 13:18 by XiYP04It3Evb
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 7xHjyB3bAiwg 2026-10-24 6/300 2026-10-25 13:11 by XiYP04It3Evb
[博后之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 7xHjyB3bAiwg 2026-10-23 9/450 2026-10-25 13:02 by XiYP04It3Evb
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 7xHjyB3bAiwg 2026-10-23 8/400 2026-10-25 12:59 by XiYP04It3Evb
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 7xHjyB3bAiwg 2026-10-23 11/550 2026-10-25 12:49 by XiYP04It3Evb
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 7xHjyB3bAiwg 2026-10-23 4/200 2026-10-25 12:32 by XiYP04It3Evb
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 GVGRDgNfv7P4 2026-10-23 4/200 2026-10-25 12:10 by XiYP04It3Evb
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 7xHjyB3bAiwg 2026-10-23 11/550 2026-10-24 23:35 by XcOYG53d3x4p
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 7xHjyB3bAiwg 2026-10-24 3/150 2026-10-24 18:23 by WqtG0Aem8Ufl
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 7xHjyB3bAiwg 2026-10-24 3/150 2026-10-24 15:41 by Equinoxhua
[考博] 郑州大学申博 +5 stars~ 2026-10-19 8/400 2026-10-22 15:06 by stars~
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭