| 查看: 1340 | 回复: 2 | ||
gwdavid木虫 (著名写手)
小木虫散兵坑坑长
|
[求助]
关于构建的双质粒菌，第一代摇菌培养就发现丢失质粒的问题
|
|
各位大神，最近在做双质粒构建，用的是PET28b和pACYCA载体，分别是氯霉素和四环素抗性，固体板和液体培养基用的都是30~50mg/ml的浓度。总共做了7个基因的表达，其中5种都成功了，摇菌扩大培养做菌落PCR后可见两种质粒扩增产物。但有两个基因，从固体板上挑的单菌落做PCR没有问题，但将单菌落整到液体培养基中培养后再P，怎么做都丢质粒，一个基因只能P出PET28b这个载体，另外一个基因两个质粒都P不出来。 我想请教的问题是： 1. 板和液体LB中都加了双抗性，如果丢了一个质粒怎么还可能生长呢？ 2. 这第一代就丢质粒的情况，可能是什么原因呢？如何改善？ 先谢谢各位了！ |
回复此楼» 猜你喜欢
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有228人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
-
透明质酸酶的作用机制：如何实现药物递送
已经有0人回复
-
爱思维尔旗下LWT投稿
已经有9人回复
-
替拉扎明为缺氧选择性细胞毒药物研究提供新思路
已经有0人回复
-
拉坦前列腺素(Latanoprost)：前列腺素F2α衍生物如何成为青光眼一线用药
已经有0人回复
-
卟啉家族中的明星分子：MESO-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉的性质与制备
已经有1人回复
-
宠物寄生虫防治：氟雷拉纳阻断GABA受体，持效12周驱杀跳蚤蜱虫
已经有0人回复
-
为呼吸打开通道：依伐卡托的科学之旅
已经有0人回复
2楼2015-07-23 07:03:28
黄小萌萌
银虫 (小有名气)
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 310.2
- 散金: 1
- 帖子: 122
- 在线: 77.7小时
- 虫号: 4085495
- 注册: 2015-09-19
- 性别: MM
- 专业: 肿瘤化学药物治疗
3楼2016-04-30 09:45:51