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gwdavid木虫 (著名写手)
小木虫散兵坑坑长
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[求助]
关于构建的双质粒菌，第一代摇菌培养就发现丢失质粒的问题
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各位大神，最近在做双质粒构建，用的是PET28b和pACYCA载体，分别是氯霉素和四环素抗性，固体板和液体培养基用的都是30~50mg/ml的浓度。总共做了7个基因的表达，其中5种都成功了，摇菌扩大培养做菌落PCR后可见两种质粒扩增产物。但有两个基因，从固体板上挑的单菌落做PCR没有问题，但将单菌落整到液体培养基中培养后再P，怎么做都丢质粒，一个基因只能P出PET28b这个载体，另外一个基因两个质粒都P不出来。 我想请教的问题是： 1. 板和液体LB中都加了双抗性，如果丢了一个质粒怎么还可能生长呢？ 2. 这第一代就丢质粒的情况，可能是什么原因呢？如何改善？ 先谢谢各位了！ |
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