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gwdavid

木虫 (著名写手)

小木虫散兵坑坑长

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[求助] 关于构建的双质粒菌，第一代摇菌培养就发现丢失质粒的问题

各位大神，最近在做双质粒构建，用的是PET28b和pACYCA载体，分别是氯霉素和四环素抗性，固体板和液体培养基用的都是30~50mg/ml的浓度。总共做了7个基因的表达，其中5种都成功了，摇菌扩大培养做菌落PCR后可见两种质粒扩增产物。但有两个基因，从固体板上挑的单菌落做PCR没有问题，但将单菌落整到液体培养基中培养后再P，怎么做都丢质粒，一个基因只能P出PET28b这个载体，另外一个基因两个质粒都P不出来。

我想请教的问题是：
1. 板和液体LB中都加了双抗性，如果丢了一个质粒怎么还可能生长呢？
2. 这第一代就丢质粒的情况，可能是什么原因呢？如何改善？

先谢谢各位了！

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