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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 质谱分析 » 色谱柱过载，另类解决办法，有经验的进来一起探讨下……
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xubang123

金虫 (小有名气)

[交流] 色谱柱过载，另类解决办法，有经验的进来一起探讨下……

最近做了一个比较特别的项目，和大家探讨下：
分析物特点：1）极性大，在色谱柱中特难保留，2）分子量小， 3）信号响应低
所以好不容易开发了个方法，却发LCMS现响应不够高，进样量从5ul加到10ul色谱柱过载，峰型分叉，信号降低，后来无意中，由中性流动性换成碱性流动性，发现即使进样量达到20ul，峰型也很漂亮，信号也很好。
那么在这里色谱柱过载是什么原因造成的，为什么换成碱性的没问题了？
求高手来探讨下……
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1楼2012-11-10 22:09:09
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songzi136

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
xubang123(金币+1): 谢谢参与
xbqewpq: 金币+2, 鼓励交流~ 2012-11-12 20:43:36
分叉不一定就是过载，可能是溶剂效应。把样品溶解于初始流动相中，可以避免这种情况。碱性物质在中性流动相中是以分子和离子状态同时存在的所以可能会出现展宽和分叉的情况，在碱性溶液中是以分子状态存在，至少峰型会比较漂亮。我觉得楼主这种情况应该是溶剂效应，不是超载。
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xubang123
5楼2012-11-12 20:15:48
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triger2011

木虫 (正式写手)
★
xubang123(金币+1): 谢谢参与
你不说具体用的什么柱子，什么流动相大家就没有办法回答你的问题。
极性大，改用正相柱吧，会好一点。
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3楼2012-11-12 10:08:08
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xbqewpq

荣誉版主 (著名写手)
★
xubang123(金币+1): 谢谢参与
要看分析物的性质，在酸碱条件下的稳定性。有的就可能不适合。
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4楼2012-11-12 10:13:01
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songzi136

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xubang123 at 2012-11-17 08:59:11
你说得对，这化合物极性很大，不容易保留，化合物中有机相稍微多些，就会出现前沿拖尾的峰，如果用有机相复溶，确实保留会好些，峰型也不错，这样现象应该是溶剂效应。但有一点不是很明白，后来换了碱性流动性，其 ...

你所分析的物质应该是酸性的，或是碱性的。酸性物质在碱性溶液中主要以离子状态存在，而在中性溶液中同时以分子和离子状态存在，所以会存在拖尾等现象（可能是因为两种状态在色谱柱上的保留有差异）；若是碱性物质在碱性溶液中主要是分子状态存在。所以大多数流动相都是酸性的或是碱性的。
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8楼2012-11-17 23:00:54
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普通回帖

wu-ming

铁虫 (小有名气)
★
xubang123(金币+1): 谢谢参与
想看高手回答
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2楼2012-11-12 09:11:45
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xubang123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by triger2011 at 2012-11-12 10:08:08
你不说具体用的什么柱子，什么流动相大家就没有办法回答你的问题。
极性大，改用正相柱吧，会好一点。

色谱柱：Phenomenex Gemini C18, 3.0um, 50mm*2.0 mm
起初流动性：A:2mM NH4AC  B:0.1%FA in ACN  此刻最多进5ul，
后来变换了流动性：A:0.1%NH3.H20 with 1mM NH4AC in water B:0.1% NH3.H20 in MeoH
此刻可以进样 15ul
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6楼2012-11-16 23:41:27
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xubang123

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by songzi136 at 2012-11-12 20:15:48
分叉不一定就是过载，可能是溶剂效应。把样品溶解于初始流动相中，可以避免这种情况。碱性物质在中性流动相中是以分子和离子状态同时存在的所以可能会出现展宽和分叉的情况，在碱性溶液中是以分子状态存在，至少峰型 ...

你说得对，这化合物极性很大，不容易保留，化合物中有机相稍微多些，就会出现前沿拖尾的峰，如果用有机相复溶，确实保留会好些，峰型也不错，这样现象应该是溶剂效应。但有一点不是很明白，后来换了碱性流动性，其他的条件都没改变，为什么峰型就好了了？
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7楼2012-11-17 08:59:11
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xubang123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by songzi136 at 2012-11-17 23:00:54
你所分析的物质应该是酸性的，或是碱性的。酸性物质在碱性溶液中主要以离子状态存在，而在中性溶液中同时以分子和离子状态存在，所以会存在拖尾等现象（可能是因为两种状态在色谱柱上的保留有差异）；若是碱性物质 ...

谢谢您的回答，这些天查阅一些资料，以下解释和您说的比较接近，也比较让人信服。
化合物在反相条件下呈电中性时，上样量可以增加20-80倍。
这可以解释PH变化，进样量增加，峰形更好。
但在中性下进样20ul,出现前沿和拖尾，这怎么解释，这会不会是因为溶剂效应导致的，如果是，那么在碱性条件下为什么溶剂效应消失了？
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9楼2012-11-25 15:48:53
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陈木娣

禁虫
★
xubang123(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
10楼2021-12-17 12:52:26
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神豪在天

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by songzi136 at 2012-11-12 15:15:48
分叉不一定就是过载，可能是溶剂效应。把样品溶解于初始流动相中，可以避免这种情况。碱性物质在中性流动相中是以分子和离子状态同时存在的所以可能会出现展宽和分叉的情况，在碱性溶液中是以分子状态存在，至少峰型 ...

答主有没有好的文章推荐下，就是出峰问题的
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11楼2021-12-18 15:30:49
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longyi706565

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by xubang123 at 2012-11-25 15:48:53
谢谢您的回答，这些天查阅一些资料，以下解释和您说的比较接近，也比较让人信服。
化合物在反相条件下呈电中性时，上样量可以增加20-80倍。
这可以解释PH变化，进样量增加，峰形更好。
但在中性下进样20ul,出现 ...

当化合物以分子形态和离子形态同时存在时，因两者极性差异和形态间的比例不同且不断比换以及和流动相及色谱柱硅羟基的作用下，可能在色谱图上表现为未分离的肩峰和拖尾峰。另外进样体积越大，这种现在越明显。

这种情况，调整pH以使化合物以单一形态存在，就能有极大的改善或消失。

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12楼2021-12-19 14:02:59
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