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xubang123

金虫 (小有名气)

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虫号: 803089

[交流] 色谱柱过载，另类解决办法，有经验的进来一起探讨下……

最近做了一个比较特别的项目，和大家探讨下：
分析物特点：1）极性大，在色谱柱中特难保留，2）分子量小， 3）信号响应低
所以好不容易开发了个方法，却发LCMS现响应不够高，进样量从5ul加到10ul色谱柱过载，峰型分叉，信号降低，后来无意中，由中性流动性换成碱性流动性，发现即使进样量达到20ul，峰型也很漂亮，信号也很好。
那么在这里色谱柱过载是什么原因造成的，为什么换成碱性的没问题了？
求高手来探讨下……

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1楼2012-11-10 22:09:09

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

longyi706565

金虫 (正式写手)

ACI: 1
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★
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引用回帖:

9楼: Originally posted by xubang123 at 2012-11-25 15:48:53
谢谢您的回答，这些天查阅一些资料，以下解释和您说的比较接近，也比较让人信服。
化合物在反相条件下呈电中性时，上样量可以增加20-80倍。
这可以解释PH变化，进样量增加，峰形更好。
但在中性下进样20ul,出现 ...

当化合物以分子形态和离子形态同时存在时，因两者极性差异和形态间的比例不同且不断比换以及和流动相及色谱柱硅羟基的作用下，可能在色谱图上表现为未分离的肩峰和拖尾峰。另外进样体积越大，这种现在越明显。

这种情况，调整pH以使化合物以单一形态存在，就能有极大的改善或消失。

发自小木虫Android客户端