应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR退火时间选择
121/2返回列表12下一页
查看: 3061  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

tulip1213

银虫 (小有名气)

[求助] PCR退火时间选择

最近做菌液PCR，鉴定克隆；之前我退火时间总是选择在30秒，今天用了1min，结果引物二聚体很亮，连非特异性条带都没有。
退火时间30秒还是一分钟合适？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-11-09 15:40:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

448935271

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我用的是半分钟的
赞一下(1人) 回复此楼
万物皆有毒，只要剂量足
2楼2012-11-09 16:14:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

金丝铁线

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-11-10 15:34:08
引物二聚体很亮，你应该多考虑其他因素，引物本身，pcr结束后是否在室温放置太长时间，引物量过大 or 模板浓度过小等，也可以取你所要加的上下游引物混合后，在100摄氏度下的沸水中煮5分钟，然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却，这时再加入反应体系当中，引物二聚体就会消失的，也有人通过95°预变性5分钟据说效果也可以。。。你说的那个延长退火时间，我也看到过类似的说法，能减少二聚体。。没试过，但我觉得毕竟不是主要原因把，把其他方面做好，应该就没问题啦
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-09 16:44:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天空2011

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
退火时间是与引物的长度有关的，因此，一般30s就足够了。
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-09 16:56:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ziwen120717

木虫 (初入文坛)
个人觉得，楼主把目光放在为什么没有特异性条带上比较好。
赞一下 回复此楼
不想写了
5楼2012-11-09 16:59:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

愤怒的小笨鸟

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也是用30s，没问题的
赞一下 回复此楼
6楼2012-11-09 21:35:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

duzhichao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大部分都是30s，时间长了，会特异性的扩增。
赞一下 回复此楼
天道酬勤！
7楼2012-11-10 00:28:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tulip1213

银虫 (小有名气)
谢谢各位回帖，重新做了一次，没有条带，继续做克隆吧
赞一下 回复此楼
8楼2012-11-10 17:17:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sc5921041

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
30s usually  and the temperature is about 55-64
赞一下 回复此楼
nostalgia
9楼2012-11-11 00:17:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
时间只是跟片段大小有关，建议提高退火温度。
赞一下 回复此楼
10楼2012-11-11 11:09:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tulip1213 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +3 番茄头--- 2026-03-22 4/200 2026-03-23 18:35 by macy2011
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程（085601） +3 WW.' 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:18 by 枫翼ljj
[考研] 石河子大学（211、双一流）硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 289求调剂 +7 怀瑾握瑜l 2026-03-20 7/350 2026-03-22 15:57 by ColorlessPI
[考研] 305分求调剂（食品工程） +4 Sxy112 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:26 by 无懈可击111
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 085600材料与化工306 +4 z1z2z3879 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:44 by ms629
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +5 holy J 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:42 by Catalysis25
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 346求调剂[0856] +4 WayneLim327 2026-03-16 7/350 2026-03-21 04:02 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭