24小时热门版块排行榜    

查看: 3088  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

tulip1213

银虫 (小有名气)

[求助] PCR退火时间选择

最近做菌液PCR,鉴定克隆;之前我退火时间总是选择在30秒,今天用了1min,结果引物二聚体很亮,连非特异性条带都没有。
退火时间30秒还是一分钟合适?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ziwen120717

木虫 (初入文坛)

个人觉得,楼主把目光放在为什么没有特异性条带上比较好。
不想写了
5楼2012-11-09 16:59:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

448935271

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我用的是半分钟的
万物皆有毒,只要剂量足
2楼2012-11-09 16:14:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

金丝铁线

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-11-10 15:34:08
引物二聚体很亮,你应该多考虑其他因素,引物本身,pcr结束后是否在室温放置太长时间,引物量过大 or 模板浓度过小等,也可以取你所要加的上下游引物混合后,在100摄氏度下的沸水中煮5分钟,然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却,这时再加入反应体系当中,引物二聚体就会消失的,也有人通过95°预变性5分钟据说效果也可以。。。你说的那个延长退火时间,我也看到过类似的说法,能减少二聚体。。没试过,但我觉得毕竟不是主要原因把,把其他方面做好,应该就没问题啦
3楼2012-11-09 16:44:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天空2011

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
退火时间是与引物的长度有关的,因此,一般30s就足够了。
4楼2012-11-09 16:56:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856求调剂 +5 zhn03 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:58 by peike
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 3/150 2026-03-25 21:13 by 给你你注意休息
[考研] 机械学硕总分317求调剂!!!! +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 26考研-291分-厦门大学(085601)-柔性电子学院材料工程专业求调剂 +3 min3 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:22 by xcjcqu
[考研] 材料学硕333求调剂 +4 北道巷 2026-03-24 4/200 2026-03-25 14:16 by mapenggao
[考研] 271求调剂 +4 生如夏花… 2026-03-22 4/200 2026-03-25 11:25 by userper
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +4 13831862839 2026-03-24 5/250 2026-03-25 09:47 by 无际的草原
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +6  ̄^ ̄゜汗 2026-03-19 9/450 2026-03-23 19:53 by pswait
[考研] 一志愿070300浙大化学358分,求调剂! +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 一志愿中南化学(0703)总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 一志愿南大,0703化学,分数336,求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
信息提示
请填处理意见