24小时热门版块排行榜    

查看: 5227  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

seebinghe

银虫 (正式写手)

[求助] 超声破碎细胞之后 离心转速问题

蛋白在膜和包涵体中都有,超声破碎之后,用多大转速离心分离比较好?新手,不知该怎么办,求各位大侠指教!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maychao123

银虫 (小有名气)

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-08 13:50:26
引用回帖:
8楼: Originally posted by seebinghe at 2012-11-05 12:40:14
分过一次了,用的15000rpm,跑胶显示蛋白在膜上 和包涵体中都有。那次是和一个在表达在膜上的蛋白一起离心的,结果被师姐痛骂一顿,说膜上的6000rpm就可以,转速打了膜就有些下来了。想问下膜和包涵体中都有的话, ...

可是楼主用15000rpm离心的话膜和包涵体都会下来啊,那怎么确定是两个里面都有呢,只要有一个有就会在胶上有显示啊,实在不行你就多离心几次吧,先粗略分离膜和包涵体,然后各自在自己适合的转速下(稍微提高或降低一点转速,不怕损失,为了更好的分离)多离心几次纯化,不知道行不行。
Don‘tforget3Oct
9楼2012-11-06 09:53:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

AZURESKY1999

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
离心的的话, 一般设定为12000RPM(或者15000g以上)以上才可,这样能保证分子量为10kD的蛋白质离心下来,但不知你的目的蛋白分子量有多大?
2楼2012-11-04 19:58:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seebinghe

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by AZURESKY1999 at 2012-11-04 19:58:30
离心的的话, 一般设定为12000RPM(或者15000g以上)以上才可,这样能保证分子量为10kD的蛋白质离心下来,但不知你的目的蛋白分子量有多大?

分子量12kd左右   膜蛋白, 原核表达 膜和包涵体中都有~
3楼2012-11-04 20:01:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-06 17:19:48
seebinghe: 金币+3, ★★★很有帮助, 多谢指教 2012-11-08 15:52:21
这要看你想从变性蛋白还是native形式的蛋白继续往下做了。高速离心的话包涵体在沉淀里面,而活性蛋白在上清里面。既然你的目的蛋白部分形成包涵体,你可以试着改变诱导条件而改变目的蛋白在包涵体中的比例,从而便于进一步分离纯化。
4楼2012-11-05 01:11:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 12/600 2026-08-21 19:46 by kulium
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +3 羊腰板 2026-08-21 3/150 2026-08-21 19:42 by kulium
[基金申请] 科研孤儿太难了 +16 我4大白菜 2026-08-20 17/850 2026-08-21 19:07 by sakuraai
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +15 医学老男孩 2026-08-20 19/950 2026-08-21 18:54 by 医学老男孩
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 14/700 2026-08-21 16:51 by applepetty
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +15 archvillain 2026-08-15 27/1350 2026-08-21 11:32 by tim76
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 13/650 2026-08-21 08:30 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见