24小时热门版块排行榜    

查看: 4957  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

seebinghe

银虫 (正式写手)

[求助] 超声破碎细胞之后 离心转速问题

蛋白在膜和包涵体中都有,超声破碎之后,用多大转速离心分离比较好?新手,不知该怎么办,求各位大侠指教!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-06 17:19:48
seebinghe: 金币+3, ★★★很有帮助, 多谢指教 2012-11-08 15:52:21
这要看你想从变性蛋白还是native形式的蛋白继续往下做了。高速离心的话包涵体在沉淀里面,而活性蛋白在上清里面。既然你的目的蛋白部分形成包涵体,你可以试着改变诱导条件而改变目的蛋白在包涵体中的比例,从而便于进一步分离纯化。
4楼2012-11-05 01:11:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

AZURESKY1999

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
离心的的话, 一般设定为12000RPM(或者15000g以上)以上才可,这样能保证分子量为10kD的蛋白质离心下来,但不知你的目的蛋白分子量有多大?
2楼2012-11-04 19:58:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seebinghe

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by AZURESKY1999 at 2012-11-04 19:58:30
离心的的话, 一般设定为12000RPM(或者15000g以上)以上才可,这样能保证分子量为10kD的蛋白质离心下来,但不知你的目的蛋白分子量有多大?

分子量12kd左右   膜蛋白, 原核表达 膜和包涵体中都有~
3楼2012-11-04 20:01:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

AZURESKY1999

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖


seebinghe: 金币+1, 有帮助, 多谢参与 2012-11-08 15:53:01
引用回帖:
3楼: Originally posted by seebinghe at 2012-11-04 20:01:35
分子量12kd左右   膜蛋白, 原核表达 膜和包涵体中都有~...

不知道你的表达系统是哪一种,如果目的蛋白分子量在12kD的话,超声破碎后尝试用14000rpm离心条件,20min收集沉淀,WESTERN BLOT看是否是你所需要蛋白
5楼2012-11-05 07:43:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +3 十三加油 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:18 by zhukairuo
[考研] 初始318分求调剂(有工作经验) +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 271材料工程求调剂 +8 .6lL 2026-03-18 8/400 2026-03-21 00:58 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 287求调剂 +7 晨昏线与星海 2026-03-19 8/400 2026-03-20 22:19 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂,科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 生物学调剂招人!!! +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 10/500 2026-03-19 15:08 by 阳阳哇塞
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 化学工程321分求调剂 +15 大米饭! 2026-03-15 18/900 2026-03-18 14:52 by haxia
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 考研化学学硕调剂,一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油!? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
信息提示
请填处理意见