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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 超声破碎细胞之后 离心转速问题
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seebinghe

银虫 (正式写手)

[求助] 超声破碎细胞之后 离心转速问题

蛋白在膜和包涵体中都有，超声破碎之后，用多大转速离心分离比较好？新手，不知该怎么办，求各位大侠指教！
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1楼2012-11-04 18:47:32
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-06 17:19:48
seebinghe: 金币+3, ★★★很有帮助, 多谢指教 2012-11-08 15:52:21
这要看你想从变性蛋白还是native形式的蛋白继续往下做了。高速离心的话包涵体在沉淀里面，而活性蛋白在上清里面。既然你的目的蛋白部分形成包涵体，你可以试着改变诱导条件而改变目的蛋白在包涵体中的比例，从而便于进一步分离纯化。
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4楼2012-11-05 01:11:22
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AZURESKY1999

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
离心的的话， 一般设定为12000RPM（或者15000g以上）以上才可，这样能保证分子量为10kD的蛋白质离心下来，但不知你的目的蛋白分子量有多大？
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2楼2012-11-04 19:58:30
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seebinghe

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by AZURESKY1999 at 2012-11-04 19:58:30
离心的的话， 一般设定为12000RPM（或者15000g以上）以上才可，这样能保证分子量为10kD的蛋白质离心下来，但不知你的目的蛋白分子量有多大？

分子量12kd左右   膜蛋白， 原核表达 膜和包涵体中都有~
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3楼2012-11-04 20:01:35
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AZURESKY1999

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
seebinghe: 金币+1, ★有帮助, 多谢参与 2012-11-08 15:53:01
引用回帖:
3楼: Originally posted by seebinghe at 2012-11-04 20:01:35
分子量12kd左右   膜蛋白， 原核表达 膜和包涵体中都有~...

不知道你的表达系统是哪一种，如果目的蛋白分子量在12kD的话，超声破碎后尝试用14000rpm离心条件，20min收集沉淀，WESTERN BLOT看是否是你所需要蛋白
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5楼2012-11-05 07:43:15
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