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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 超低分子量SDS-PAGE
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xuyan_1215

新虫 (小有名气)

[求助] 超低分子量SDS-PAGE

各位虫友：
    我最近在做小肽蛋白的表达，由于目的蛋白分子量特别小（7.8KD）用常规的SDS-PAGE方法跑不出来，请教一下是否有人做过超低分子量蛋白电泳，以及具体的实验步骤，谢谢。。。
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1楼 2012-11-01 08:13:24
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xuyan_1215: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-01 11:09:37
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-02 13:36:01
给你一个文档，里面是三层胶的具体配方，还有阴极阳极液体的配方。

跑三层胶的时候，最好把电压降低一点，在冰上跑，这样跑出来的胶质量会比较好，不会糊掉。


Tricine-SDS-PAGE具体步骤.doc(32KB)
http://kuai.xunlei.com/d/GFUNGFPLMHGH?p=130497
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2楼2012-11-01 09:27:01
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普通回帖

xuyan_1215

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gelois at 2012-11-01 09:27:01
给你一个文档，里面是三层胶的具体配方，还有阴极阳极液体的配方。

跑三层胶的时候，最好把电压降低一点，在冰上跑，这样跑出来的胶质量会比较好，不会糊掉。


Tricine-SDS-PAGE具体步骤.doc(32KB)
http:// ...

请问你说的在冰上跑的意思就是要把电泳槽放到冰上吗？还有，我的目的蛋白是7.8KD的，分离胶是用16%的还是用20%的比较合适？
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3楼2012-11-01 11:10:51
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gelois

金虫 (正式写手)
amisking: 回帖置顶 2012-11-01 19:56:57
引用回帖:
3楼: Originally posted by xuyan_1215 at 2012-11-01 11:10:51
请问你说的在冰上跑的意思就是要把电泳槽放到冰上吗？还有，我的目的蛋白是7.8KD的，分离胶是用16%的还是用20%的比较合适？...

恩，是的，把电泳槽埋在冰里。
7.8的话，16%应该就可以跑出来了，20%的估计会跑的更加慢，而且效果还不一定会好。用16%的吧。
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米曲霉淀粉酶
4楼2012-11-01 11:16:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
7.8kD算是超低分子量？分这个范围的蛋白不用Tricine胶也可以的，可以在普通SDS-PAGE中加尿素。也可以做一个梯度胶。
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5楼2012-11-01 14:55:54
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xuyan_1215

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gelois at 2012-11-01 11:16:42
恩，是的，把电泳槽埋在冰里。
7.8的话，16%应该就可以跑出来了，20%的估计会跑的更加慢，而且效果还不一定会好。用16%的吧。...

好的，谢谢！
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6楼2012-11-01 18:59:21
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xuyan_1215

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-01 14:55:54
7.8kD算是超低分子量？分这个范围的蛋白不用Tricine胶也可以的，可以在普通SDS-PAGE中加尿素。也可以做一个梯度胶。

因为我买的marker是超低分子量的，说明书中要求用Tricine胶来跑，我之前用SDS-PAGE一直跑不出来。。。
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7楼2012-11-01 19:00:47
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xuyan_1215 at 2012-11-01 19:00:47
因为我买的marker是超低分子量的，说明书中要求用Tricine胶来跑，我之前用SDS-PAGE一直跑不出来。。。...

如果你想用Tricine胶来跑当然没问题，普通Laemmli胶也不是不能跑的。低分子量marker不用Tricine胶一般分不开。但你是做表达吧，跑胶不就是为了看表达，做做Western什么的，跑得不是特别开也没关系吧。
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8楼2012-11-02 07:07:03
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xuyan_1215

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-02 07:07:03
如果你想用Tricine胶来跑当然没问题，普通Laemmli胶也不是不能跑的。低分子量marker不用Tricine胶一般分不开。但你是做表达吧，跑胶不就是为了看表达，做做Western什么的，跑得不是特别开也没关系吧。...

嗯，是的，谢谢！
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9楼2012-11-02 08:14:25
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米曲霉淀粉酶

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by gelois at 2012-11-01 11:16:42
恩，是的，把电泳槽埋在冰里。
7.8的话，16%应该就可以跑出来了，20%的估计会跑的更加慢，而且效果还不一定会好。用16%的吧。...

大牛你好：
       我也开始学跑低分子量电泳，以前实验室没人做过，我的抗菌多肽是4KD左右，而且文献上说60℃还有100%活性，更牛的是跑完电泳后还有活性，可以直接拿来做抑菌实验，想请教下那我用多少浓度的分离胶，还有那还要冰浴电泳吗？
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10楼2012-12-25 09:32:20
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