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xuyan_1215

新虫 (小有名气)

[求助] 超低分子量SDS-PAGE

各位虫友:
    我最近在做小肽蛋白的表达,由于目的蛋白分子量特别小(7.8KD)用常规的SDS-PAGE方法跑不出来,请教一下是否有人做过超低分子量蛋白电泳,以及具体的实验步骤,谢谢。。。
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xuyan_1215: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-01 11:09:37
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-02 13:36:01
给你一个文档,里面是三层胶的具体配方,还有阴极阳极液体的配方。

跑三层胶的时候,最好把电压降低一点,在冰上跑,这样跑出来的胶质量会比较好,不会糊掉。


Tricine-SDS-PAGE具体步骤.doc(32KB)
http://kuai.xunlei.com/d/GFUNGFPLMHGH?p=130497
2楼2012-11-01 09:27:01
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普通回帖

xuyan_1215

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gelois at 2012-11-01 09:27:01
给你一个文档,里面是三层胶的具体配方,还有阴极阳极液体的配方。

跑三层胶的时候,最好把电压降低一点,在冰上跑,这样跑出来的胶质量会比较好,不会糊掉。


Tricine-SDS-PAGE具体步骤.doc(32KB)
http:// ...

请问你说的在冰上跑的意思就是要把电泳槽放到冰上吗?还有,我的目的蛋白是7.8KD的,分离胶是用16%的还是用20%的比较合适?
3楼2012-11-01 11:10:51
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gelois

金虫 (正式写手)

amisking: 回帖置顶 2012-11-01 19:56:57
引用回帖:
3楼: Originally posted by xuyan_1215 at 2012-11-01 11:10:51
请问你说的在冰上跑的意思就是要把电泳槽放到冰上吗?还有,我的目的蛋白是7.8KD的,分离胶是用16%的还是用20%的比较合适?...

恩,是的,把电泳槽埋在冰里。
7.8的话,16%应该就可以跑出来了,20%的估计会跑的更加慢,而且效果还不一定会好。用16%的吧。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2012-11-01 11:16:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

7.8kD算是超低分子量?分这个范围的蛋白不用Tricine胶也可以的,可以在普通SDS-PAGE中加尿素。也可以做一个梯度胶。
5楼2012-11-01 14:55:54
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xuyan_1215

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gelois at 2012-11-01 11:16:42
恩,是的,把电泳槽埋在冰里。
7.8的话,16%应该就可以跑出来了,20%的估计会跑的更加慢,而且效果还不一定会好。用16%的吧。...

好的,谢谢!
6楼2012-11-01 18:59:21
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xuyan_1215

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-01 14:55:54
7.8kD算是超低分子量?分这个范围的蛋白不用Tricine胶也可以的,可以在普通SDS-PAGE中加尿素。也可以做一个梯度胶。

因为我买的marker是超低分子量的,说明书中要求用Tricine胶来跑,我之前用SDS-PAGE一直跑不出来。。。
7楼2012-11-01 19:00:47
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
7楼: Originally posted by xuyan_1215 at 2012-11-01 19:00:47
因为我买的marker是超低分子量的,说明书中要求用Tricine胶来跑,我之前用SDS-PAGE一直跑不出来。。。...

如果你想用Tricine胶来跑当然没问题,普通Laemmli胶也不是不能跑的。低分子量marker不用Tricine胶一般分不开。但你是做表达吧,跑胶不就是为了看表达,做做Western什么的,跑得不是特别开也没关系吧。
8楼2012-11-02 07:07:03
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xuyan_1215

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-02 07:07:03
如果你想用Tricine胶来跑当然没问题,普通Laemmli胶也不是不能跑的。低分子量marker不用Tricine胶一般分不开。但你是做表达吧,跑胶不就是为了看表达,做做Western什么的,跑得不是特别开也没关系吧。...

嗯,是的,谢谢!
9楼2012-11-02 08:14:25
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米曲霉淀粉酶

铜虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by gelois at 2012-11-01 11:16:42
恩,是的,把电泳槽埋在冰里。
7.8的话,16%应该就可以跑出来了,20%的估计会跑的更加慢,而且效果还不一定会好。用16%的吧。...

大牛你好:
       我也开始学跑低分子量电泳,以前实验室没人做过,我的抗菌多肽是4KD左右,而且文献上说60℃还有100%活性,更牛的是跑完电泳后还有活性,可以直接拿来做抑菌实验,想请教下那我用多少浓度的分离胶,还有那还要冰浴电泳吗?
10楼2012-12-25 09:32:20
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