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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 超低分子量SDS-PAGE
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gelois

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 米曲霉淀粉酶 at 2012-12-25 09:32:20
大牛你好：
       我也开始学跑低分子量电泳，以前实验室没人做过，我的抗菌多肽是4KD左右，而且文献上说60℃还有100%活性，更牛的是跑完电泳后还有活性，可以直接拿来做抑菌实验，想请教下那我用多少浓度的分离 ...

额。。。。你的蛋白好牛逼。。。。。
只有4KD的话，就只能跑Tricine-SDS-PAGE了，2楼的文件里面有配方，按照里面的步骤做就可以了。跑Tricine-SDS-PAGE的话，最好就是要冰浴跑胶，因为它放热很严重，温度太高，跑出来的效果会很差，胶的质量也会很不好。
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11楼2012-12-25 12:42:08
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米曲霉淀粉酶

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by gelois at 2012-12-25 12:42:08
额。。。。你的蛋白好牛逼。。。。。
只有4KD的话，就只能跑Tricine-SDS-PAGE了，2楼的文件里面有配方，按照里面的步骤做就可以了。跑Tricine-SDS-PAGE的话，最好就是要冰浴跑胶，因为它放热很严重，温度太高，跑 ...

非常感谢，marker有没什么要注意的啊

我打算就用上海生工的BM201-100ul 品牌BBI （4.1KD,6.5KD,9.5KD,...66KD)共九条带可以吗
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12楼2012-12-25 14:59:54
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gelois

金虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 米曲霉淀粉酶 at 2012-12-25 14:59:54
非常感谢，marker有没什么要注意的啊

我打算就用上海生工的BM201-100ul 品牌BBI （4.1KD,6.5KD,9.5KD,...66KD)共九条带可以吗...

理论上可以的，就是跑胶的时候要注意，要让MARKER跑开一点，不然下面的小分子会挤在一块，看不清。但是又要防止跑过了，因为你的蛋白很小，而且MARKER最小值正好是你蛋白的大小，一不小心跑过了就啥都看不见了。。。。
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13楼2012-12-25 15:10:37
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米曲霉淀粉酶

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by gelois at 2012-12-25 15:10:37
理论上可以的，就是跑胶的时候要注意，要让MARKER跑开一点，不然下面的小分子会挤在一块，看不清。但是又要防止跑过了，因为你的蛋白很小，而且MARKER最小值正好是你蛋白的大小，一不小心跑过了就啥都看不见了。。 ...

在tricine-SDS-PAGE中，预染和非预染的marker都可以是吧？？
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14楼2012-12-25 18:06:44
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gelois

金虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 米曲霉淀粉酶 at 2012-12-25 18:06:44
在tricine-SDS-PAGE中，预染和非预染的marker都可以是吧？？...

是的，都可以，不过一般用非预染的就行了，便宜。
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15楼2012-12-26 08:57:22
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