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gelois

金虫 (正式写手)

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10楼: Originally posted by 米曲霉淀粉酶 at 2012-12-25 09:32:20
大牛你好:
       我也开始学跑低分子量电泳,以前实验室没人做过,我的抗菌多肽是4KD左右,而且文献上说60℃还有100%活性,更牛的是跑完电泳后还有活性,可以直接拿来做抑菌实验,想请教下那我用多少浓度的分离 ...

额。。。。你的蛋白好牛逼。。。。。
只有4KD的话,就只能跑Tricine-SDS-PAGE了,2楼的文件里面有配方,按照里面的步骤做就可以了。跑Tricine-SDS-PAGE的话,最好就是要冰浴跑胶,因为它放热很严重,温度太高,跑出来的效果会很差,胶的质量也会很不好。
11楼2012-12-25 12:42:08
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米曲霉淀粉酶

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by gelois at 2012-12-25 12:42:08
额。。。。你的蛋白好牛逼。。。。。
只有4KD的话,就只能跑Tricine-SDS-PAGE了,2楼的文件里面有配方,按照里面的步骤做就可以了。跑Tricine-SDS-PAGE的话,最好就是要冰浴跑胶,因为它放热很严重,温度太高,跑 ...

非常感谢,marker有没什么要注意的啊

我打算就用上海生工的BM201-100ul 品牌BBI (4.1KD,6.5KD,9.5KD,...66KD)共九条带可以吗
12楼2012-12-25 14:59:54
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gelois

金虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 米曲霉淀粉酶 at 2012-12-25 14:59:54
非常感谢,marker有没什么要注意的啊

我打算就用上海生工的BM201-100ul 品牌BBI (4.1KD,6.5KD,9.5KD,...66KD)共九条带可以吗...

理论上可以的,就是跑胶的时候要注意,要让MARKER跑开一点,不然下面的小分子会挤在一块,看不清。但是又要防止跑过了,因为你的蛋白很小,而且MARKER最小值正好是你蛋白的大小,一不小心跑过了就啥都看不见了。。。。
13楼2012-12-25 15:10:37
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米曲霉淀粉酶

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by gelois at 2012-12-25 15:10:37
理论上可以的,就是跑胶的时候要注意,要让MARKER跑开一点,不然下面的小分子会挤在一块,看不清。但是又要防止跑过了,因为你的蛋白很小,而且MARKER最小值正好是你蛋白的大小,一不小心跑过了就啥都看不见了。。 ...

在tricine-SDS-PAGE中,预染和非预染的marker都可以是吧??
14楼2012-12-25 18:06:44
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gelois

金虫 (正式写手)

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14楼: Originally posted by 米曲霉淀粉酶 at 2012-12-25 18:06:44
在tricine-SDS-PAGE中,预染和非预染的marker都可以是吧??...

是的,都可以,不过一般用非预染的就行了,便宜。
15楼2012-12-26 08:57:22
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