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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 超低分子量SDS-PAGE
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xuyan_1215

新虫 (小有名气)

[求助] 超低分子量SDS-PAGE

各位虫友：
    我最近在做小肽蛋白的表达，由于目的蛋白分子量特别小（7.8KD）用常规的SDS-PAGE方法跑不出来，请教一下是否有人做过超低分子量蛋白电泳，以及具体的实验步骤，谢谢。。。
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1楼 2012-11-01 08:13:24
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米曲霉淀粉酶

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by gelois at 2012-12-25 12:42:08
额。。。。你的蛋白好牛逼。。。。。
只有4KD的话，就只能跑Tricine-SDS-PAGE了，2楼的文件里面有配方，按照里面的步骤做就可以了。跑Tricine-SDS-PAGE的话，最好就是要冰浴跑胶，因为它放热很严重，温度太高，跑 ...

非常感谢，marker有没什么要注意的啊

我打算就用上海生工的BM201-100ul 品牌BBI （4.1KD,6.5KD,9.5KD,...66KD)共九条带可以吗
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12楼2012-12-25 14:59:54
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xuyan_1215: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-01 11:09:37
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-02 13:36:01
给你一个文档，里面是三层胶的具体配方，还有阴极阳极液体的配方。

跑三层胶的时候，最好把电压降低一点，在冰上跑，这样跑出来的胶质量会比较好，不会糊掉。


Tricine-SDS-PAGE具体步骤.doc(32KB)
http://kuai.xunlei.com/d/GFUNGFPLMHGH?p=130497
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2楼2012-11-01 09:27:01
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xuyan_1215

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gelois at 2012-11-01 09:27:01
给你一个文档，里面是三层胶的具体配方，还有阴极阳极液体的配方。

跑三层胶的时候，最好把电压降低一点，在冰上跑，这样跑出来的胶质量会比较好，不会糊掉。


Tricine-SDS-PAGE具体步骤.doc(32KB)
http:// ...

请问你说的在冰上跑的意思就是要把电泳槽放到冰上吗？还有，我的目的蛋白是7.8KD的，分离胶是用16%的还是用20%的比较合适？
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3楼2012-11-01 11:10:51
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gelois

金虫 (正式写手)
amisking: 回帖置顶 2012-11-01 19:56:57
引用回帖:
3楼: Originally posted by xuyan_1215 at 2012-11-01 11:10:51
请问你说的在冰上跑的意思就是要把电泳槽放到冰上吗？还有，我的目的蛋白是7.8KD的，分离胶是用16%的还是用20%的比较合适？...

恩，是的，把电泳槽埋在冰里。
7.8的话，16%应该就可以跑出来了，20%的估计会跑的更加慢，而且效果还不一定会好。用16%的吧。
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米曲霉淀粉酶
4楼2012-11-01 11:16:42
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