24小时热门版块排行榜    

查看: 891  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

梦-妖精

铁虫 (初入文坛)

[求助] 5‘race的反转录

1、我用的是takara的5’race试剂盒,前面去磷酸化反应,干燥沉淀的时候,没有在冰上操作,会不会影响RNA啊?因为说明书上也没说要在冰上操作,所以我也没有在冰上干燥去磷酸化的RNA。
2、经过去磷酸化、去帽子反应之后,到了反转录的地方,里面说dNTP要加1微升,我不小心加了2微升,别的没有变,就是总体积应该是10微升,现在是11微升,这样对我的反转录得到的cDNA会有影响吗?
请大家指教~~多谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦-妖精

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by tulip1213 at 2012-10-19 23:02:05
扩基因要一气呵成的。最好不要中断。RNA没降解,就一定能扩出基因来的。祝你好运。做不出来再重做。没必要犹豫

这个RNA提的超级亮,导师不给买贵的,我只能用现有的,操作是很麻烦,所以就怕哪个步骤没在冰上操作,RNA会有所影响~
5楼2012-10-19 23:04:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

tulip1213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
TAKARA的试剂盒没用过,楼主为啥不用宝日医(克隆达,现被TAKARA兼并)的试剂盒?既然你已经得到cDNA,为啥不接着往下做?做了才知道你的cDNA灵不灵?
2楼2012-10-19 22:12:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦-妖精

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tulip1213 at 2012-10-19 22:12:42
TAKARA的试剂盒没用过,楼主为啥不用宝日医(克隆达,现被TAKARA兼并)的试剂盒?既然你已经得到cDNA,为啥不接着往下做?做了才知道你的cDNA灵不灵?

恩,是导师选的试剂盒,我也没有发言权啊~我引物还没回来呢,就是怕操作上有问题,结果会不如人意~也可能cDNA好使,但是就是扩增不出来呢,那样就不知道是哪里出了问题了,所以我要先保证,我做的这些不会影响我的cDNA~
3楼2012-10-19 22:45:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tulip1213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

扩基因要一气呵成的。最好不要中断。RNA没降解,就一定能扩出基因来的。祝你好运。做不出来再重做。没必要犹豫
4楼2012-10-19 23:02:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +5 Tide man 2026-08-14 6/300 2026-08-14 17:26 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[基金申请] 好奇怪的filecode +6 布布和一二 2026-08-08 7/350 2026-08-14 13:38 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
信息提示
请填处理意见