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梦-妖精

铁虫 (初入文坛)

[求助] 5‘race的反转录

1、我用的是takara的5’race试剂盒，前面去磷酸化反应，干燥沉淀的时候，没有在冰上操作，会不会影响RNA啊？因为说明书上也没说要在冰上操作，所以我也没有在冰上干燥去磷酸化的RNA。
2、经过去磷酸化、去帽子反应之后，到了反转录的地方，里面说dNTP要加1微升，我不小心加了2微升，别的没有变，就是总体积应该是10微升，现在是11微升，这样对我的反转录得到的cDNA会有影响吗？
请大家指教~~多谢
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1楼 2012-10-19 21:47:35
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tulip1213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
TAKARA的试剂盒没用过，楼主为啥不用宝日医（克隆达，现被TAKARA兼并）的试剂盒？既然你已经得到cDNA，为啥不接着往下做？做了才知道你的cDNA灵不灵？
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2楼2012-10-19 22:12:42
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梦-妖精

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tulip1213 at 2012-10-19 22:12:42
TAKARA的试剂盒没用过，楼主为啥不用宝日医（克隆达，现被TAKARA兼并）的试剂盒？既然你已经得到cDNA，为啥不接着往下做？做了才知道你的cDNA灵不灵？

恩，是导师选的试剂盒，我也没有发言权啊~我引物还没回来呢，就是怕操作上有问题，结果会不如人意~也可能cDNA好使，但是就是扩增不出来呢，那样就不知道是哪里出了问题了，所以我要先保证，我做的这些不会影响我的cDNA~
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3楼2012-10-19 22:45:51
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tulip1213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

扩基因要一气呵成的。最好不要中断。RNA没降解，就一定能扩出基因来的。祝你好运。做不出来再重做。没必要犹豫
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4楼2012-10-19 23:02:05
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梦-妖精

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by tulip1213 at 2012-10-19 23:02:05
扩基因要一气呵成的。最好不要中断。RNA没降解，就一定能扩出基因来的。祝你好运。做不出来再重做。没必要犹豫

这个RNA提的超级亮，导师不给买贵的，我只能用现有的，操作是很麻烦，所以就怕哪个步骤没在冰上操作，RNA会有所影响~
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5楼2012-10-19 23:04:58
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