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梦-妖精

铁虫 (初入文坛)

[求助] 5‘race的反转录

1、我用的是takara的5’race试剂盒,前面去磷酸化反应,干燥沉淀的时候,没有在冰上操作,会不会影响RNA啊?因为说明书上也没说要在冰上操作,所以我也没有在冰上干燥去磷酸化的RNA。
2、经过去磷酸化、去帽子反应之后,到了反转录的地方,里面说dNTP要加1微升,我不小心加了2微升,别的没有变,就是总体积应该是10微升,现在是11微升,这样对我的反转录得到的cDNA会有影响吗?
请大家指教~~多谢
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梦-妖精

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tulip1213 at 2012-10-19 22:12:42
TAKARA的试剂盒没用过,楼主为啥不用宝日医(克隆达,现被TAKARA兼并)的试剂盒?既然你已经得到cDNA,为啥不接着往下做?做了才知道你的cDNA灵不灵?

恩,是导师选的试剂盒,我也没有发言权啊~我引物还没回来呢,就是怕操作上有问题,结果会不如人意~也可能cDNA好使,但是就是扩增不出来呢,那样就不知道是哪里出了问题了,所以我要先保证,我做的这些不会影响我的cDNA~
3楼2012-10-19 22:45:51
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tulip1213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
TAKARA的试剂盒没用过,楼主为啥不用宝日医(克隆达,现被TAKARA兼并)的试剂盒?既然你已经得到cDNA,为啥不接着往下做?做了才知道你的cDNA灵不灵?
2楼2012-10-19 22:12:42
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tulip1213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

扩基因要一气呵成的。最好不要中断。RNA没降解,就一定能扩出基因来的。祝你好运。做不出来再重做。没必要犹豫
4楼2012-10-19 23:02:05
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梦-妖精

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by tulip1213 at 2012-10-19 23:02:05
扩基因要一气呵成的。最好不要中断。RNA没降解,就一定能扩出基因来的。祝你好运。做不出来再重做。没必要犹豫

这个RNA提的超级亮,导师不给买贵的,我只能用现有的,操作是很麻烦,所以就怕哪个步骤没在冰上操作,RNA会有所影响~
5楼2012-10-19 23:04:58
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