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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR提总RNA时，最后溶于DEPC水时有沉淀，不能完全溶解，是什么原因，能怎么补救
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zhuzhuba1

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR提总RNA时，最后溶于DEPC水时有沉淀，不能完全溶解，是什么原因，能怎么补救

大鼠足爪样本，同样取两个样本，同样条件，最后，一个样本在溶于DEPC水时有白色沉淀，稍一放置就分层，上层很透明，下层白色沉淀，之前在加异丙醇时沉淀就稍大，最后260/280的比值只有1.4，浓度300多，现在的关键问题是我没时间再做一批动物实验，有没有什么补救措施，再出现这种情况
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1楼 2012-10-19 19:10:08
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yanzimeng1

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-10-20 08:03:51
看天: 金币+2, 鼓励交流 常来 2012-10-23 17:30:31
没做过动物的，但是我做过植物的，不过道理应当是一样的。你可以把这批样品重新纯化一下，也就是重新用氯仿等按步骤重新抽提。你这样的应该是RNA中有不溶性的物质。另外在重新抽提的时候可以加大体系，也就是你的RNA如果溶解在100微升的水中，那么可以再加些DEPC水进去，把体系变大。这样在加入抽提剂纯化的时候，RNA损失量要小些。我提取植物RNA的时候碰到过这种情况，不知道对你的实验是否合适，可以试试。希望能帮到你。
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2楼2012-10-19 19:37:32
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wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)
PCR提？好吧，没用过这方法……

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2012-10-20 09:14:34
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zhuzhuba1

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yanzimeng1 at 2012-10-19 19:37:32
没做过动物的，但是我做过植物的，不过道理应当是一样的。你可以把这批样品重新纯化一下，也就是重新用氯仿等按步骤重新抽提。你这样的应该是RNA中有不溶性的物质。另外在重新抽提的时候可以加大体系，也就是你的RN ...

这个沉淀到底哪一步产生的，重新提，加多少氯仿呢，原来是加1mltrizol加0.2ml氯仿的，还是加0.2ml氯仿吗
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4楼2012-10-22 20:03:50
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Everpower

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
看天: 金币+3, 鼓励交流 2012-10-23 17:31:02
我经常提动物组织RNA，如果遇到加DEPC水而有白色沉淀不溶，有可能是RNA量太多了，而导致的不溶，也有可能没有涡旋震荡，充分涡旋后就能溶解了！
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5楼2012-10-23 10:44:07
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yanzimeng1

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
看天: 金币+3, 鼓励热情交流 2012-10-23 17:31:25
zhuzhuba1: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-23 18:49:43
不会是因为量大引起的吧。
因为核酸本身很容易溶于水的，量再大，如果提的质量比较好，加点水很容易就溶解了，动物应该比植物更好提取才是。我说的重新抽提，就是你把溶于水的MRNA当做最初始的样品溶液，重新按自己的步骤再来一遍就是了。我们用的方法不同，你按自己的方法，根据样品溶液的体积再来就是了。而不是具体加多少氯仿等等，因法而异吧。
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6楼2012-10-23 13:00:33
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zhuzhuba1

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yanzimeng1 at 2012-10-23 13:00:33
不会是因为量大引起的吧。
因为核酸本身很容易溶于水的，量再大，如果提的质量比较好，加点水很容易就溶解了，动物应该比植物更好提取才是。我说的重新抽提，就是你把溶于水的MRNA当做最初始的样品溶液，重新按自己 ...

我今天又做了一遍，最后还有些许的白色沉淀，静置几分钟，下方有白色沉淀物，上方液体很清澈，我提了上清去测，浓度7点多很低，然后用枪抽打几下后再提取测，浓度就600多，纯度也有1.7多，但没超过1.8，真不知道那些白色沉淀是什么，按道理我抽打后，浓度上来了，应该是rna，但为什么他不溶于水呢，不会是我的DEPC水有问题？
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7楼2012-10-23 19:04:22
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永远不知道

至尊木虫 (著名写手)

金花家族创始人

【答案】应助回帖

★
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-10-24 07:24:13
的确可能你的水有问题啊，换个角度想下吧
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8楼2012-10-24 00:24:07
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wky427

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

没有关系的，这个不会对你的RNA有影响，回溶的沉淀可以弃掉
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9楼2012-10-24 13:30:25
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