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zhuzhuba1

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR提总RNA时,最后溶于DEPC水时有沉淀,不能完全溶解,是什么原因,能怎么补救

大鼠足爪样本,同样取两个样本,同样条件,最后,一个样本在溶于DEPC水时有白色沉淀,稍一放置就分层,上层很透明,下层白色沉淀,之前在加异丙醇时沉淀就稍大,最后260/280的比值只有1.4,浓度300多,现在的关键问题是我没时间再做一批动物实验,有没有什么补救措施,再出现这种情况
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zhuzhuba1

银虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by yanzimeng1 at 2012-10-19 19:37:32
没做过动物的,但是我做过植物的,不过道理应当是一样的。你可以把这批样品重新纯化一下,也就是重新用氯仿等按步骤重新抽提。你这样的应该是RNA中有不溶性的物质。另外在重新抽提的时候可以加大体系,也就是你的RN ...

这个沉淀到底哪一步产生的,重新提,加多少氯仿呢,原来是加1mltrizol加0.2ml氯仿的,还是加0.2ml氯仿吗
4楼2012-10-22 20:03:50
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zhuzhuba1

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yanzimeng1 at 2012-10-23 13:00:33
不会是因为量大引起的吧。
因为核酸本身很容易溶于水的,量再大,如果提的质量比较好,加点水很容易就溶解了,动物应该比植物更好提取才是。我说的重新抽提,就是你把溶于水的MRNA当做最初始的样品溶液,重新按自己 ...

我今天又做了一遍,最后还有些许的白色沉淀,静置几分钟,下方有白色沉淀物,上方液体很清澈,我提了上清去测,浓度7点多很低,然后用枪抽打几下后再提取测,浓度就600多,纯度也有1.7多,但没超过1.8,真不知道那些白色沉淀是什么,按道理我抽打后,浓度上来了,应该是rna,但为什么他不溶于水呢,不会是我的DEPC水有问题?
7楼2012-10-23 19:04:22
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