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zhuzhuba1

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR提总RNA时,最后溶于DEPC水时有沉淀,不能完全溶解,是什么原因,能怎么补救

大鼠足爪样本,同样取两个样本,同样条件,最后,一个样本在溶于DEPC水时有白色沉淀,稍一放置就分层,上层很透明,下层白色沉淀,之前在加异丙醇时沉淀就稍大,最后260/280的比值只有1.4,浓度300多,现在的关键问题是我没时间再做一批动物实验,有没有什么补救措施,再出现这种情况
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yanzimeng1

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
看天: 金币+3, 鼓励热情交流 2012-10-23 17:31:25
zhuzhuba1: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-23 18:49:43
不会是因为量大引起的吧。
因为核酸本身很容易溶于水的,量再大,如果提的质量比较好,加点水很容易就溶解了,动物应该比植物更好提取才是。我说的重新抽提,就是你把溶于水的MRNA当做最初始的样品溶液,重新按自己的步骤再来一遍就是了。我们用的方法不同,你按自己的方法,根据样品溶液的体积再来就是了。而不是具体加多少氯仿等等,因法而异吧。
6楼2012-10-23 13:00:33
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yanzimeng1

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-10-20 08:03:51
看天: 金币+2, 鼓励交流 常来 2012-10-23 17:30:31
没做过动物的,但是我做过植物的,不过道理应当是一样的。你可以把这批样品重新纯化一下,也就是重新用氯仿等按步骤重新抽提。你这样的应该是RNA中有不溶性的物质。另外在重新抽提的时候可以加大体系,也就是你的RNA如果溶解在100微升的水中,那么可以再加些DEPC水进去,把体系变大。这样在加入抽提剂纯化的时候,RNA损失量要小些。我提取植物RNA的时候碰到过这种情况,不知道对你的实验是否合适,可以试试。希望能帮到你。
2楼2012-10-19 19:37:32
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wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)

PCR提?好吧,没用过这方法……

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2012-10-20 09:14:34
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zhuzhuba1

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yanzimeng1 at 2012-10-19 19:37:32
没做过动物的,但是我做过植物的,不过道理应当是一样的。你可以把这批样品重新纯化一下,也就是重新用氯仿等按步骤重新抽提。你这样的应该是RNA中有不溶性的物质。另外在重新抽提的时候可以加大体系,也就是你的RN ...

这个沉淀到底哪一步产生的,重新提,加多少氯仿呢,原来是加1mltrizol加0.2ml氯仿的,还是加0.2ml氯仿吗
4楼2012-10-22 20:03:50
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