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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR提总RNA时，最后溶于DEPC水时有沉淀，不能完全溶解，是什么原因，能怎么补救
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zhuzhuba1

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR提总RNA时，最后溶于DEPC水时有沉淀，不能完全溶解，是什么原因，能怎么补救

大鼠足爪样本，同样取两个样本，同样条件，最后，一个样本在溶于DEPC水时有白色沉淀，稍一放置就分层，上层很透明，下层白色沉淀，之前在加异丙醇时沉淀就稍大，最后260/280的比值只有1.4，浓度300多，现在的关键问题是我没时间再做一批动物实验，有没有什么补救措施，再出现这种情况
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1楼 2012-10-19 19:10:08
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永远不知道

至尊木虫 (著名写手)

金花家族创始人

【答案】应助回帖

★
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-10-24 07:24:13
的确可能你的水有问题啊，换个角度想下吧
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8楼2012-10-24 00:24:07
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yanzimeng1

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-10-20 08:03:51
看天: 金币+2, 鼓励交流 常来 2012-10-23 17:30:31
没做过动物的，但是我做过植物的，不过道理应当是一样的。你可以把这批样品重新纯化一下，也就是重新用氯仿等按步骤重新抽提。你这样的应该是RNA中有不溶性的物质。另外在重新抽提的时候可以加大体系，也就是你的RNA如果溶解在100微升的水中，那么可以再加些DEPC水进去，把体系变大。这样在加入抽提剂纯化的时候，RNA损失量要小些。我提取植物RNA的时候碰到过这种情况，不知道对你的实验是否合适，可以试试。希望能帮到你。
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2楼2012-10-19 19:37:32
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wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)
PCR提？好吧，没用过这方法……

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2012-10-20 09:14:34
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zhuzhuba1

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yanzimeng1 at 2012-10-19 19:37:32
没做过动物的，但是我做过植物的，不过道理应当是一样的。你可以把这批样品重新纯化一下，也就是重新用氯仿等按步骤重新抽提。你这样的应该是RNA中有不溶性的物质。另外在重新抽提的时候可以加大体系，也就是你的RN ...

这个沉淀到底哪一步产生的，重新提，加多少氯仿呢，原来是加1mltrizol加0.2ml氯仿的，还是加0.2ml氯仿吗
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4楼2012-10-22 20:03:50
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