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zhangpamela木虫 (小有名气)
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[求助]
酶的分离纯化
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| 我要纯化一种从细菌提取出来的未知粗酶，盐析后上离子交换，等电点未知，我准备选用DEAE-sephroseFF 填料试一试，但不知道选什么缓冲液，pH调为多少？不知道这种填料合适不？100ml的填料能用几次？还挺贵的，一般这种未知的是首选阴离子呢还是阳离子？ |
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【答案】应助回帖
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先做粗酶液pH稳定性的实验，确定了稳定范围之后再选择层析柱。 Effect of pH and temperature on glucoamylase activity and stability The effect of pH on glucoamylase activity is measuring glucoamylase activity at different pH value of pH 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0 at 37ºC. The effect of temperature on glucoamylase activity is measuring glucoamylase activity at different temperature of 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 and 60ºC at optimum pH. The effect of pH on glucoamylase stability was conducted by mixing 0.1mL enzyme with 0.9mL 0.1M buffer in different pH value (The buffers used were: citrate-phosphate buffer, pH 3.0–7.0; sodium-phosphate buffer, pH 6.0–8.0; Tris-HCl buffer, pH 7.0–9.0; and glycine-NaOH buffer, pH 8.5–12.0). The mixtures were incubated at 4ºCfor 24h, and the residue enzyme activity were measured. The effect of temperature on enzyme stability was conducted by incubating enzyme at 30, 35, 40, 45, and 50ºC for 1 h, and the residue enzyme activity were measured. Each result of the character assay was showed by a scatter diagram with trend line, the highest activity was defined as 100%, other activity was defined as relative activity. The error bars represent the standard deviation of triplicate measurements. |
3楼2012-10-20 15:42:34
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4楼2012-10-20 15:46:44
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