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weining1203

新虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 1728956
注册: 2012-03-31
专业: 植物遗传学

[求助] 做原核表达又出现问题了

做原核表达，使用pET-32a表达载体，酶切位点为sacI和Xhol，
上游引物 5G GAGCTC（SacI）ATGGTTGCAGCAGCAGAAAT3
下游引物 5CCG CTCGAG（Xhol）TCAGAATGGGCCAGGAGTTC3
问题就在这，实验室的pET-32a酶切位点发生突变了，于是问同学要，结果它只有pET-28a，同学不做相关的实验，不知道能不能通用，有点着急，请做过的同学指点一下迷津，先谢谢了

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1楼 2012-10-12 20:20:55

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hippo_li

金虫 (小有名气)

应助: 27 (小学生)
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虫号: 1907308
注册: 2012-07-23
专业: 环境微生物学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
weining1203: 金币+8, ★★★很有帮助 2012-10-16 19:33:32

pET-28a与pET32a不一样的是它没有Trx-tag和S-tag，只有His-tag。Trx-tag是硫氧还蛋白，可以助溶，如果你本身的蛋白表达出来可溶性就很高，没有Trx-tag也没关系，但是如果你的蛋白本身可溶性低的话，用pET28a表达出来的就可能是包涵体。S-tag和His-tag都是可以用来做westen blot的标签，其中His-tag可以用来纯化蛋白。