| 查看: 2222 | 回复: 10 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
weining1203新虫 (小有名气)
|
[求助]
做原核表达又出现问题了
|
|
|
做原核表达，使用pET-32a表达载体，酶切位点为sacI和Xhol， 上游引物 5G GAGCTC（SacI）ATGGTTGCAGCAGCAGAAAT3 下游引物 5CCG CTCGAG（Xhol）TCAGAATGGGCCAGGAGTTC3 问题就在这，实验室的pET-32a酶切位点发生突变了，于是问同学要，结果它只有pET-28a，同学不做相关的实验，不知道能不能通用，有点着急，请做过的同学指点一下迷津，先谢谢了 |
回复此楼» 猜你喜欢
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有292人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 做原核表达引物设计的有关问题
已经有14人回复
- 蛋白激酶原核表达
已经有14人回复
- 原核表达，蛋白活性问题
已经有12人回复
- 原核表达 pET32a和pET30a Western blot问题
已经有9人回复
- 原核表达的问题
已经有3人回复
- 原核表达问题
已经有14人回复
- 关于原核表达中，IPTG,KAN等的配制和最终工作浓度问题！！！
已经有16人回复
- 原核表达SDS-PAGE问题
已经有7人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
weining1203: 金币+8, ★★★很有帮助 2012-10-16 19:33:32
感谢参与，应助指数 +1
weining1203: 金币+8, ★★★很有帮助 2012-10-16 19:33:32
| pET-28a与pET32a不一样的是它没有Trx-tag和S-tag，只有His-tag。Trx-tag是硫氧还蛋白，可以助溶，如果你本身的蛋白表达出来可溶性就很高，没有Trx-tag也没关系，但是如果你的蛋白本身可溶性低的话，用pET28a表达出来的就可能是包涵体。S-tag和His-tag都是可以用来做westen blot的标签，其中His-tag可以用来纯化蛋白。 |
weining12034楼2012-10-13 09:53:44
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
| pET-28a也有你设计的那两个酶切位点，所以可以用。不过28a没有Trx-tag。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
2楼2012-10-13 08:07:09
weining1203
新虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 9.9
- 散金: 5
- 帖子: 132
- 在线: 36.4小时
- 虫号: 1728956
- 注册: 2012-03-31
- 专业: 植物遗传学
3楼2012-10-13 09:33:36
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
|
Trx-tag和GST-tag都可以增加融合蛋白的可溶性。如果你要表达的蛋白水溶性差容易形成包涵体，多个tag会有帮助。对大多数可溶蛋白来说，没有trx-tag影响不大，pET-28a也是大家常用的一个表达载体。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
5楼2012-10-13 09:55:34
