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smdsfy

铜虫 (小有名气)

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[求助] DNA回收质量

各位虫友们好，我最近遇到了一直困扰我的问题，就是DNA的回收。每次回收的效率都很低，你们一般回收的效率是多高呢？经常出现回收玩跑胶就没东西啦，很是郁闷，请各位大侠指教，谢谢！

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1楼2012-10-10 11:36:30

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cicelyzh

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【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-10-11 15:55:26

引用回帖:

5楼: Originally posted by smdsfy at 2012-10-10 13:51:48
PCR的产物需要回收，然后酶切，酶切后回收基本上就没有东西啦

我都是PCR产物回收，然后酶切，再回收做连。你有没有用nanodrop定一下各步骤的量？你大概要做50-100 ul的PCR体系。第一次回收后大概可以得到1-3 ug的DNA。做酶切一般用0.5-2 ug，做连只要50-100ng, 最后回收的产物足够你做一二十次连接的。即使每次回收损失50%，也不至于没有东西吧。