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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA回收质量
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smdsfy

铜虫 (小有名气)

[求助] DNA回收质量

各位虫友们好，我最近遇到了一直困扰我的问题，就是DNA的回收。每次回收的效率都很低，你们一般回收的效率是多高呢？经常出现回收玩跑胶就没东西啦，很是郁闷，请各位大侠指教，谢谢！
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1楼2012-10-10 11:36:30
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junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
您回收的是什么DNA？PCR产物？质粒？基因组DNA？
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2楼2012-10-10 12:03:46
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你回收试剂盒是什么牌子的啊，回收是完全按照说明书操作的吗？
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持之以恒、永不放弃！
3楼2012-10-10 12:17:49
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-11 15:55:14
PCR产物或者酶切产物的回收率相对不错，大概可以到80%，切胶回收稍微差一点，50-60%。再说你回收的目的是什么呢？酶切，做连，还是PCR？
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4楼2012-10-10 12:21:21
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smdsfy

铜虫 (小有名气)
PCR的产物需要回收，然后酶切，酶切后回收基本上就没有东西啦
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5楼2012-10-10 13:51:48
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gonglab-5

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR产物直接酶切就行，我们都是这么做的，酶切好以后再胶回收。你那样子回收两次，肯定得到目的产物效率太低了
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6楼2012-10-10 18:44:19
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-10-11 15:55:26
引用回帖:
5楼: Originally posted by smdsfy at 2012-10-10 13:51:48
PCR的产物需要回收，然后酶切，酶切后回收基本上就没有东西啦

我都是PCR产物回收，然后酶切，再回收做连。你有没有用nanodrop定一下各步骤的量？你大概要做50-100 ul的PCR体系。第一次回收后大概可以得到1-3 ug的DNA。做酶切一般用0.5-2 ug，做连只要50-100ng, 最后回收的产物足够你做一二十次连接的。即使每次回收损失50%，也不至于没有东西吧。
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7楼2012-10-11 06:39:40
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