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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

[求助] 克隆某个生物活性物质生物合成途径中关键酶的基因

最近小弟在克隆一个活性物质生物合成途径关键酶基因,这个基因是属于下游一个关键酶的基因,之前我实验室的我师兄师姐克隆的都是上游关键酶基因,发现他们实验很顺利,我的实验就比较苦逼!  在此,小弟想问一下,对于上游基因和下游基因在克隆的时候,是不是难易程度不一样,下游基因相对来说不好做?  苦闷呀!  谢谢各位大侠!  求指教!!
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勤能补拙
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dayulee

木虫 (正式写手)

愚木虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
能介绍下你是采取什么样的手段去克隆的吗?是简单的PCR扩增还是用其他的分子手段呢?
好好学习,天天向上
2楼2012-10-09 20:09:51
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dayulee at 2012-10-09 20:09:51
能介绍下你是采取什么样的手段去克隆的吗?是简单的PCR扩增还是用其他的分子手段呢?

RACE(3'RACE   和 5‘RACE)
勤能补拙
3楼2012-10-09 21:52:55
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dayulee

木虫 (正式写手)

愚木虫

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-10-10 19:19:54
你是3‘和5’都没有做出来吗?我觉得下游基因表达量有可能会受到上游基因的调控,你选择材料提取RNA的时候,采用表达量高的时期进行,或许有点改进。有个朋友做动物材料,也是一直表达不成功,后来他们用病毒刺激该基因表达上调,再做5race就成功了。对了你之前做的5RACE 成功没?
好好学习,天天向上
4楼2012-10-10 08:47:15
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dayulee at 2012-10-10 08:47:15
你是3‘和5’都没有做出来吗?我觉得下游基因表达量有可能会受到上游基因的调控,你选择材料提取RNA的时候,采用表达量高的时期进行,或许有点改进。有个朋友做动物材料,也是一直表达不成功,后来他们用病毒刺激该 ...

我的3‘RACE做出来了,现在就差5’端了,之后又做了一次5‘RACE,切胶回收正在测序等待阶段,测序结果还没出来。谢谢哥哥帮忙了,以后有什么不懂得就请教您了,谢谢!!
勤能补拙
5楼2012-10-10 12:27:47
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dayulee at 2012-10-10 08:47:15
你是3‘和5’都没有做出来吗?我觉得下游基因表达量有可能会受到上游基因的调控,你选择材料提取RNA的时候,采用表达量高的时期进行,或许有点改进。有个朋友做动物材料,也是一直表达不成功,后来他们用病毒刺激该 ...

对了,哥哥有QQ吗?能不能给个QQ号。谢谢!
勤能补拙
6楼2012-10-10 12:28:33
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dayulee

木虫 (正式写手)

愚木虫

【答案】应助回帖

281362603  你加吧
好好学习,天天向上
7楼2012-10-13 12:47:04
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by dayulee at 2012-10-13 12:47:04
281362603  你加吧

谢谢哥哥!
勤能补拙
8楼2012-10-13 19:21:10
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