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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒大小如何检测
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xiaoyang123

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒大小如何检测

有一个质粒，大小大约在30kb-80kb之间。同学们是否知道有什么marker适合测这么大的质粒。
       另外，是否需要用超螺旋marker呢，或者如何使质粒变成线性的，用普通marker来测？
       多谢各位！
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1楼 2012-09-11 10:08:21
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
xiaoyang123: 金币+3, ★有帮助 2012-09-13 12:25:58
引用回帖:
6楼: Originally posted by xiaoyang123 at 2012-09-11 11:47:21
我平时用到的marker最大条带通常是10kb，是否有更大的marker呢，能否提供具体的牌子和型号，多谢！...

低拷贝质粒一般我是提取10ml菌液，然后酶切鉴定，大的MARKER 我们用的是TAKALA DL15 000.
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7楼2012-09-11 14:07:32
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jqscdw

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
那就大提质粒，500ml培养液，提出来的质粒足够酶切和鉴定了。
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天行健君子自强不息
8楼2012-09-11 15:48:36
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
xiaoyang123: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-14 15:56:44
引用回帖:
12楼: Originally posted by xiaoyang123 at 2012-09-13 12:25:32
请问你用的48kb Marker是什么牌子的呢，我的质粒如果大小在48kb以下，或许可以用这个marker鉴定一下。...

记得好像是Fermentas的Marker，记不太清楚了，你上Fermentas的官网看看呗
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16楼2012-09-14 08:34:18
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普通回帖

无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoyang123: 金币+5, ★有帮助 2012-09-11 10:25:03
有超螺旋maker,但是没怎么用过，一般电泳时候对照用一个已知质粒，大小鉴定的话用酶切
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2楼2012-09-11 10:20:05
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dewey3600

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoyang123: 金币+5, ★有帮助 2012-09-11 11:46:04
一般选择酶切，然后与marker比对，有大条带的marker
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3楼2012-09-11 10:24:23
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xiaoyang123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 无疆@行者 at 2012-09-11 10:20:05
有超螺旋maker,但是没怎么用过，一般电泳时候对照用一个已知质粒，大小鉴定的话用酶切

由于质粒较大，浓度又较低，因而酶切效果总是不佳，无法充分酶切，或者酶切条带弱。
    对于低拷贝大质粒，有什么方法能够得到较高的浓度，或者怎样能使酶切效果更好呢？
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4楼2012-09-11 10:26:52
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoyang123: 金币+5, ★有帮助 2012-09-11 11:45:48
你可以试着将提取的质粒浓缩一下，酶切时加大用量，选择合适的酶单/双酶切！
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持之以恒、永不放弃！
5楼2012-09-11 10:34:07
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xiaoyang123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dewey3600 at 2012-09-11 10:24:23
一般选择酶切，然后与marker比对，有大条带的marker

我平时用到的marker最大条带通常是10kb，是否有更大的marker呢，能否提供具体的牌子和型号，多谢！
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6楼2012-09-11 11:47:21
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoyang123: 金币+3, ★有帮助 2012-09-13 12:29:05
有48kb Marker，我以前用过，但是貌似也不太适合你的质粒
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9楼2012-09-13 08:58:22
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sd3824289

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoyang123: 金币+2, ★有帮助 2012-09-13 12:29:22
选择一个大分子的DNA Marker，然后用单一酶切处理，处理后的质粒是线性质粒，通过和Marker比对比较直观。
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坚持，就像流星，即使知道最后的结果，也要勇敢的走到最后！
10楼2012-09-13 09:07:22
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