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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xiaoyang123: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢,是PFGE么? 2012-09-14 11:08:31
以前学过,大分子量DNA电泳可能需要脉冲场电泳,查查这方面资料吧,还有好多文献上应该有这方面内容,查点文献
11楼2012-09-13 10:16:01
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xiaoyang123

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by jl860822 at 2012-09-13 08:58:22
有48kb Marker,我以前用过,但是貌似也不太适合你的质粒

请问你用的48kb Marker是什么牌子的呢,我的质粒如果大小在48kb以下,或许可以用这个marker鉴定一下。
12楼2012-09-13 12:25:32
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xiaoyang123

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 无疆@行者 at 2012-09-11 14:07:32
低拷贝质粒一般我是提取10ml菌液,然后酶切鉴定,大的MARKER 我们用的是TAKALA DL15 000....

请问提10mL菌液是用碱裂解法手提,还是用试剂盒提的
  曾经听说过静置培养(不摇)可以提高质粒拷贝数,你对此是怎么看的呢?
  提质粒摇菌到什么生长时期最合适,对质粒提取效果的影响大不大呢?
  多谢!
13楼2012-09-13 12:28:54
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无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
xiaoyang123: 金币+12, ★★★很有帮助, 感谢~~ 2012-09-14 11:09:10
引用回帖:
13楼: Originally posted by xiaoyang123 at 2012-09-13 12:28:54
请问提10mL菌液是用碱裂解法手提,还是用试剂盒提的
  曾经听说过静置培养(不摇)可以提高质粒拷贝数,你对此是怎么看的呢?
  提质粒摇菌到什么生长时期最合适,对质粒提取效果的影响大不大呢?
  多谢!...

用的是qiangen的盒子提的,一般1:100接种的,16到20个小时 ,时间长点好。静置培养没用过,个人觉得不是很靠谱
14楼2012-09-13 18:29:12
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chui2004

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
超螺旋Marker不是有开环的吗?这样跑出来的电泳不好看吧,也不好判断吧!
相信自己,一定能成功!
15楼2012-09-13 22:16:29
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

★ ★
xiaoyang123: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-14 15:56:44
引用回帖:
12楼: Originally posted by xiaoyang123 at 2012-09-13 12:25:32
请问你用的48kb Marker是什么牌子的呢,我的质粒如果大小在48kb以下,或许可以用这个marker鉴定一下。...

记得好像是Fermentas的Marker,记不太清楚了,你上Fermentas的官网看看呗
16楼2012-09-14 08:34:18
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xiaoyang123

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-09-11 10:34:07
你可以试着将提取的质粒浓缩一下,酶切时加大用量,选择合适的酶单/双酶切!

如果用旋转真空浓缩,35℃,是否会影响质粒的结构呢,你觉得哪种浓缩方法更合适呢?
17楼2012-09-14 11:06:39
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

★ ★ ★
xiaoyang123: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-09-14 15:57:09
引用回帖:
17楼: Originally posted by xiaoyang123 at 2012-09-14 11:06:39
如果用旋转真空浓缩,35℃,是否会影响质粒的结构呢,你觉得哪种浓缩方法更合适呢?...

不会的,我们经常用抽真空浓缩仪!
持之以恒、永不放弃!
18楼2012-09-14 11:12:52
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maothree54

至尊木虫 (知名作家)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xiaoyang123: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-09-14 15:58:06
Takara公司就有一种广泛Marker,你可以试一下,我们都是用这个来电泳的
多动大脑,严谨的搞科研!
19楼2012-09-14 13:15:06
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

请酶切后再鉴定其分子量大小。
20楼2012-09-14 13:16:23
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