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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒大小如何检测
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoyang123: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢，是PFGE么？ 2012-09-14 11:08:31
以前学过，大分子量DNA电泳可能需要脉冲场电泳，查查这方面资料吧，还有好多文献上应该有这方面内容，查点文献
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11楼2012-09-13 10:16:01
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xiaoyang123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by jl860822 at 2012-09-13 08:58:22
有48kb Marker，我以前用过，但是貌似也不太适合你的质粒

请问你用的48kb Marker是什么牌子的呢，我的质粒如果大小在48kb以下，或许可以用这个marker鉴定一下。
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12楼2012-09-13 12:25:32
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xiaoyang123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 无疆@行者 at 2012-09-11 14:07:32
低拷贝质粒一般我是提取10ml菌液，然后酶切鉴定，大的MARKER 我们用的是TAKALA DL15 000....

请问提10mL菌液是用碱裂解法手提，还是用试剂盒提的
  曾经听说过静置培养（不摇）可以提高质粒拷贝数，你对此是怎么看的呢？
  提质粒摇菌到什么生长时期最合适，对质粒提取效果的影响大不大呢？
  多谢！
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13楼2012-09-13 12:28:54
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无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
xiaoyang123: 金币+12, ★★★很有帮助, 感谢~~ 2012-09-14 11:09:10
引用回帖:
13楼: Originally posted by xiaoyang123 at 2012-09-13 12:28:54
请问提10mL菌液是用碱裂解法手提，还是用试剂盒提的
  曾经听说过静置培养（不摇）可以提高质粒拷贝数，你对此是怎么看的呢？
  提质粒摇菌到什么生长时期最合适，对质粒提取效果的影响大不大呢？
  多谢！...

用的是qiangen的盒子提的，一般1:100接种的，16到20个小时 ，时间长点好。静置培养没用过，个人觉得不是很靠谱
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14楼2012-09-13 18:29:12
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chui2004

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
超螺旋Marker不是有开环的吗？这样跑出来的电泳不好看吧，也不好判断吧!
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相信自己，一定能成功！
15楼2012-09-13 22:16:29
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
xiaoyang123: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-14 15:56:44
引用回帖:
12楼: Originally posted by xiaoyang123 at 2012-09-13 12:25:32
请问你用的48kb Marker是什么牌子的呢，我的质粒如果大小在48kb以下，或许可以用这个marker鉴定一下。...

记得好像是Fermentas的Marker，记不太清楚了，你上Fermentas的官网看看呗
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16楼2012-09-14 08:34:18
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xiaoyang123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-09-11 10:34:07
你可以试着将提取的质粒浓缩一下，酶切时加大用量，选择合适的酶单/双酶切！

如果用旋转真空浓缩，35℃，是否会影响质粒的结构呢，你觉得哪种浓缩方法更合适呢？
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17楼2012-09-14 11:06:39
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

★ ★ ★
xiaoyang123: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-09-14 15:57:09
引用回帖:
17楼: Originally posted by xiaoyang123 at 2012-09-14 11:06:39
如果用旋转真空浓缩，35℃，是否会影响质粒的结构呢，你觉得哪种浓缩方法更合适呢？...

不会的，我们经常用抽真空浓缩仪！
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持之以恒、永不放弃！
18楼2012-09-14 11:12:52
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maothree54

至尊木虫 (知名作家)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xiaoyang123: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-09-14 15:58:06
Takara公司就有一种广泛Marker，你可以试一下，我们都是用这个来电泳的
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多动大脑，严谨的搞科研！
19楼2012-09-14 13:15:06
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

请酶切后再鉴定其分子量大小。
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20楼2012-09-14 13:16:23
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