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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒大小如何检测
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xiaoyang123

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒大小如何检测

有一个质粒，大小大约在30kb-80kb之间。同学们是否知道有什么marker适合测这么大的质粒。
       另外，是否需要用超螺旋marker呢，或者如何使质粒变成线性的，用普通marker来测？
       多谢各位！
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1楼 2012-09-11 10:08:21
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xiaoyang123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 无疆@行者 at 2012-09-11 14:07:32
低拷贝质粒一般我是提取10ml菌液，然后酶切鉴定，大的MARKER 我们用的是TAKALA DL15 000....

请问提10mL菌液是用碱裂解法手提，还是用试剂盒提的
  曾经听说过静置培养（不摇）可以提高质粒拷贝数，你对此是怎么看的呢？
  提质粒摇菌到什么生长时期最合适，对质粒提取效果的影响大不大呢？
  多谢！
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13楼2012-09-13 12:28:54
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无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoyang123: 金币+5, ★有帮助 2012-09-11 10:25:03
有超螺旋maker,但是没怎么用过，一般电泳时候对照用一个已知质粒，大小鉴定的话用酶切
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2楼2012-09-11 10:20:05
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dewey3600

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoyang123: 金币+5, ★有帮助 2012-09-11 11:46:04
一般选择酶切，然后与marker比对，有大条带的marker
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3楼2012-09-11 10:24:23
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xiaoyang123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 无疆@行者 at 2012-09-11 10:20:05
有超螺旋maker,但是没怎么用过，一般电泳时候对照用一个已知质粒，大小鉴定的话用酶切

由于质粒较大，浓度又较低，因而酶切效果总是不佳，无法充分酶切，或者酶切条带弱。
    对于低拷贝大质粒，有什么方法能够得到较高的浓度，或者怎样能使酶切效果更好呢？
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4楼2012-09-11 10:26:52
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