24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 3654  |  回复: 29
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

麦子绿豆

银虫 (小有名气)

[求助] 几丁质酶测酶活的方法 已有1人参与

小弟在测几丁质酶的酶活,是筛选得到的菌株进行摇瓶发酵后测酶活。
发酵培养基只含有几丁质和一些无机矿物离子,发酵三天后测活。
采用DNS法,1mg/ml的葡萄糖做标准曲线。

问题是:1)阳性对照也没有活性
2)分别对发酵液上清、粗酶液、胞内蛋白进行测活,均没有活性

附测活方法:取上清,加入缓冲液,再加入胶体几丁质,然后45度水浴过夜反应,之后终止反应,测活。以灭火的酶液做对照。

希望高手解答!谢谢!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生工检测理论与实务

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunnymen

银虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 麦子绿豆 at 2012-09-13 09:21:04
你好!测几丁质酶的国标我没有查到,能给个链接吗?谢谢!关于测活方法的比较可以看一下<氨基葡萄糖和乙酰氨基葡萄糖的测定方法>这篇文章。我认为用DNS法去测几丁质酶活是比较合适的方法。...

几丁质酶的测定的国标我也没找到,找到的是测纤维素酶、蛋白酶的国标。我想请问lZ,测酶活方法:取上清,加入缓冲液,再加入胶体几丁质,然后45度水浴过夜反应,之后终止反应,测活。以灭火的酶液做对照。这个是你自己设计的,还是有相关文献。
9楼2012-09-13 14:57:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 30 个回答

爱睡猪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
麦子绿豆: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-11 10:47:39
你确定你发酵之后得到了你要的菌株了 ?做个镜检试试 和你接种的微生物进行对比 看是不是你要的菌株 ,也有可能该微生物没有表达这种酶  ,我们基本都不这么做 如果确定这个微生物产几丁质酶的话 那都是提DNA 测序  然后转大肠杆菌发酵  这种技术比较成熟点
ControlMyself
2楼2012-09-10 16:48:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

麦子绿豆

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 爱睡猪 at 2012-09-10 16:48:54
你确定你发酵之后得到了你要的菌株了 ?做个镜检试试 和你接种的微生物进行对比 看是不是你要的菌株 ,也有可能该微生物没有表达这种酶  ,我们基本都不这么做 如果确定这个微生物产几丁质酶的话 那都是提DNA 测序  ...

谢谢!但是目前我是想先测得一株酶活较高的再去测序,鉴定。是测酶活这里卡住了,不过即使你说的方法,最后也是需要测酶活的吧~但我也准备尝试一下,谢谢!
3楼2012-09-11 10:47:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

num20062622

银虫 (正式写手)

楼主 我也要测酶活..
但是不是测几丁质酶
是测纤维素酶活
跟果胶酶活性
也是用DNS法。
但是目前我还不是太会
希望楼主能跟我联系 求交流...
可以么 楼主..
4楼2012-09-11 17:43:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 296求调剂 +12 汪!?! 2026-04-09 13/650 2026-04-15 20:01 by 学员JpLReM
[考研] 22专硕求调剂 +9 haoyun上岸 2026-04-11 11/550 2026-04-15 14:47 by elainzaizai
[考研] 310求调剂 +16 666真好 2026-04-11 18/900 2026-04-15 13:28 by 黑科技矿业
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-11 12/600 2026-04-14 15:37 by zs92450
[考研] 245求调剂 +6 冰糖橘?汽水 2026-04-13 10/500 2026-04-14 10:49 by jyl0317
[考研] 297工科,求调剂? +13 河南农业大学-能 2026-04-12 13/650 2026-04-13 14:12 by dingyanbo1
[考研] 材料考研调剂 +29 云木达达 2026-04-11 31/1550 2026-04-13 13:32 by lyh鲁老师
[教师之家] 山东双非院校考核超级无底线,领导幸灾乐祸,教师遭殃恐 +3 qut2026 2026-04-11 7/350 2026-04-12 20:24 by qut2026
[考研] 22408 352分求调剂 +5 努力的夏末 2026-04-09 5/250 2026-04-12 19:17 by wj165256
[考研] 一志愿厦大0856,306求调剂 +15 Bblinging 2026-04-11 15/750 2026-04-11 22:53 by 314126402
[考研] 调剂 +6 青灯不负 2026-04-09 6/300 2026-04-11 20:35 by dongdian1
[考研] 283求调剂 086004考英二数二 +17 那个噜子 2026-04-10 18/900 2026-04-11 16:27 by 明月此时有
[考研] 求调剂 +3 胃痉挛累了 2026-04-11 5/250 2026-04-11 14:13 by luhong1990
[考研] 296求调剂 +6 汪!?! 2026-04-09 6/300 2026-04-11 11:25 by zhq0425
[考研] 283求调剂 +22 那个噜子 2026-04-09 22/1100 2026-04-11 10:41 by 逆水乘风
[考研] 广东省 085601 329分求调剂 +14 Eddieddd 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:58 by bljnqdcc
[考研] 中药学调剂 初试324 +4 洋甘菊、 2026-04-10 6/300 2026-04-11 09:41 by gong120082
[考研] 085402通信工程调剂,有4项学科竞赛国奖(电赛国二),硕士研究生调剂自荐信。 +5 m永o不v言o弃m 2026-04-09 5/250 2026-04-11 09:33 by zhq0425
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +11 LZH(等待调剂中 2026-04-10 11/550 2026-04-11 08:39 by zhq0425
[考研] 314求调剂 +18 xhhdjdjsjks 2026-04-09 19/950 2026-04-10 18:53 by HPUCZ
信息提示
请填处理意见