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zlyshandon

木虫 (正式写手)

[求助] 双向电泳总是有条纹。

如图，总是有条纹在，丙酮（-20沉淀两小时），TCA(15%)沉淀都会有这个问题，一向在升压过程 中没有什么问题，电流也不会太大。是霉菌的胞内蛋白，沉淀后的蛋白浓度大概是2.5mg/ml的样子。
1、24cm的胶条多少的上样量合适？我上的是600微克。
2、样品处理为先1：1的湿菌体和玻璃珠混合后液氮研磨，再用minibeads beater间歇破碎10min(30s破碎30s冰浴)。离心后取上清沉淀。染色是胶体考染。第一次做的时候染色完成后蛋白点比较清晰，但是用超纯水脱色后就变成了条带状，不知道是为什么？有人遇到过这种情况吗？
做了好久了都是有条纹，希望哪位大侠给指导下，可以追加金币的，只要能把问题解决了。谢谢！

1.jpg
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1楼 2012-09-10 10:07:38
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DBWJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zlyshandon: 金币+5, 谢谢 2013-05-21 15:46:00
感觉你的胶图上的点聚焦不是特别好啊，上样量可以用800或1000μg，如果你的是pH3-10线性的，可以换成pH4-7线性的看看，因为你的点集中在比较中间，可以用窄范围的看看。聚焦时间可以延长一下，那个条带我也经常出现，也不知道什么原因，我出现的一般在碱性端
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5楼2013-05-21 09:13:20
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